[發明專利]口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法在審
| 申請號： | 201810123248.5 | 申請日： | 2018-02-07 |
| 公開（公告）號： | CN108114277A | 公開（公告）日： | 2018-06-05 |
| 發明（設計）人： | 姜新鵬;高利;劉娣 | 申請（專利權）人： | 姜新鵬 |
| 主分類號： | A61K39/215 | 分類號： | A61K39/215;A61K9/52;A61K47/36;A61P31/14 |
| 代理公司： | 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109 | 代理人： | 賈澤純 |
| 地址： | 150010 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 微膠囊 制備 流行性腹瀉 仔豬 活豬 病毒 微囊 誘導 疫苗 豬流行性腹瀉病毒 特異性抗體IgG 動物實驗結果 血清中和抗體 攻毒保護率 仔豬死亡率 滅活疫苗 系統免疫 效價檢測 疫苗抗原 黏膜免疫 抵抗力 血清 緩釋 抗體 應答 | ||
1.口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法，其特征在于它是按照以下步驟進行的：
一、將感染豬流行性腹瀉病毒毒株傳代培養，在傳代培養后40-50％的細胞出現細胞病變效應，收集培養的病毒毒株，并置于-80℃超低溫冰箱、室溫中反復凍融3次，以使細胞充分裂解，然后2000～4000r/min離心10min，吸取上清，即為感染豬流行性腹瀉病毒液；
二、取步驟一的感染豬流行性腹瀉病毒液加入到海藻酸鈉液中，充分混勻；以恒定的速度滴入到氯化鈣、殼聚糖乙酸的混合液中；以300-400r/min恒速攪拌使其成膜反應充分，室溫靜置30-60min，即得海藻酸鈣-殼聚糖微囊的混懸液；將混懸液過濾分離并用蒸餾水反復清洗，再將其于-80℃預冷2-3h，真空冷凍干燥，即得口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊。
2.根據權利要求1所述的口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法，其特征在于感染豬流行性腹瀉病毒毒株為JL2017毒株。
3.根據權利要求1所述的口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法，其特征在于將感染豬流行性腹瀉病毒毒株傳代培養是指將JL2017毒株在Vero-CCL81細胞上連續傳代培養。
4.根據權利要求1所述的口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法，其特征在于以恒定的速度滴入到氯化鈣、殼聚糖乙酸的混合液中是指：以60-90滴/min的速度滴入到氯化鈣、殼聚糖乙酸的混合液中。
5.根據權利要求1所述的口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法，其特征在于在傳代培養后90％的細胞出現細胞病變效應。
6.根據權利要求1所述的口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法，其特征在于以4000r/min離心30min，吸取上清，即為感染豬流行性腹瀉病毒液。
7.根據權利要求1所述的口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法，其特征在于以300r/min恒速攪拌使其成膜反應充分，室溫靜置30min，即得海藻酸鈣-殼聚糖微囊的混懸液。
8.根據權利要求1所述的口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法，其特征在于步驟一的感染豬流行性腹瀉病毒液與海藻酸鈉液的質量濃度為1.2％。
9.根據權利要求1所述的口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法，其特征在于混合液中氯化鈣與殼聚糖乙酸，其中氯化鈣質量濃度為1％，殼聚糖乙酸質量濃度為3.5％。
10.根據權利要求1所述的口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法，其特征在于-80℃預冷2.5h。
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