[發明專利]細鱗壯鱈的熒光PCR檢測方法及其引物和探針

在審

• 申請號: 201810122147.6
• 申請日: 2018-02-07
• 公開（公告）號: CN110117664A
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 吳姍;董強;虞惠貞
• 申請（專利權）人: 福建譯寧科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京京萬通知識產權代理有限公司 11440
• 代理人: 萬學堂

本發明公開了一種細鱗壯鱈的熒光PCR檢測方法及其引物和探針，該方法設計細鱗壯鱈的引物和探針，并提取細鱗壯鱈樣品中的DNA；根據所述引物和探針及DNA，進行實時熒光PCR擴增反應，獲得檢測結果；將檢測結果與預設的Ct值比較，判定樣品特性。本發明可有效地以實時熒光PCR方法對細鱗壯鱈進行物種成分檢測，結果精確，靈敏度高。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是涉及一種細鱗壯鱈的熒光PCR檢測方法及其引物和探針。

背景技術

鱈魚被稱為“餐桌上的營養師”，可見它的營養價值之高。但市面上鱈魚的名目繁多，真鱈、銀鱈、黑鱈、狹鱈、青鱈、水鱈，龍鱈、圓鱈、扁鱈等等，這些鱈魚名只能算是一種商品名，生物學分類中只有鱈形目，鱈科，鱈屬的魚類才是真正的鱈魚，而鱈屬只包括大西洋鱈魚(Gadus morhua)，格陵蘭鱈魚(Gadus ogac)和太平洋鱈魚(Gadus macrocephalus)這3種，但格陵蘭鱈魚產量較低市場上少見。

細鱗壯鱈(Albatrossia pectoralis)屬于鱈形目(Gadiformes)鼠尾鱈科(Macrouridae)壯鱈屬(Albatrossia)，是一種常常被用來當作鱈魚銷售的廉價魚類。鱈魚往往以肉片或肉段的形式進行銷售，因此細鱗壯鱈一旦去頭、去尾、去皮、切片后從外形上的確和真鱈魚非常相似。

形態學方法是傳統的動物種屬鑒定方法，但市售的鱈魚往往都以肉段肉塊的形式出現，因此，單純形態學方法進行物種鑒定往往難度較大，不能滿足對魚肉制品售假現象的監管與控制的需求。

而種屬鑒定的免疫學方法大都直接鑒定樣本中的蛋白成分，其基本原理是抗體抗原反應，但免疫學方法存在對樣本材料要求高，檢測準確率低等缺陷，如動物食品若經過加熱、腌制等處理，其蛋白結構一旦遭到破壞，免疫學方法便不再適用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種細鱗壯鱈的熒光PCR檢測方法及其引物和探針，可有效地以實時熒光PCR方法對細鱗壯鱈進行物種成分檢測，結果精確，靈敏度高。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：提供一種細鱗壯鱈的引物和探針，其中，所述引物和探針由下表中的序列組成：

其中，AP-F表示上游引物；AP-R表示下游引物；AP-P表示探針。

為解決上述問題，本發明還提供一種細鱗壯鱈的熒光PCR檢測方法，其中，至少包括如下步驟：

S1：設計細鱗壯鱈的引物和探針，所述引物和探針由下表中的序列組成：

其中，AP-F表示上游引物；AP-R表示下游引物；AP-P表示探針；

S2：提取細鱗壯鱈樣品中的DNA；

S3：根據所述引物和探針及DNA，進行實時熒光PCR擴增反應，獲得檢測結果；

S4：將檢測結果與預設的Ct值比較，判定樣品特性。

其中，所述上游引物的濃度為10pmol/μL，下游引物的濃度為10pmol/μL，探針的濃度為10pmol/μL。

其中，步驟S2具體為：

S21：獲取0.2g細鱗壯鱈樣品，并在液氮中研磨；

S22：使用DNA抽提試劑盒進行DNA抽提；

S23：將抽提后的DNA溶解在100μL水中，獲得DNA液。

其中，步驟S3具體為：