[發明專利]一種體外擴增和規模化培養間充質干細胞的方法在審
| 申請號： | 201810115674.4 | 申請日： | 2018-02-06 |
| 公開（公告）號： | CN108103015A | 公開（公告）日： | 2018-06-01 |
| 發明（設計）人： | 孟小銳 | 申請（專利權）人： | 寧波東錢湖旅游度假區靖芮醫療美容診所有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 315000 浙江省寧波市東*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 間充質干細胞 臍帶 規模化培養 消化 外擴 種體 臍帶間充質干細胞 間充質干細胞庫 病毒感染 不良環境 臍帶處理 生長過程 外界條件 外界影響 增值能力 膠原酶 新生兒 剪碎 擴增 小塊 胰酶 增速 沖洗 剪刀 監控 保證 | ||
1.一種體外擴增和規模化培養間充質干細胞的方法，其特征在于，包括以下具體步驟：
步驟一：臍帶處理：將臍帶用D-Hank’s液沖洗3～5次后用剪刀剪碎成約0.7～1.0mm
步驟二：消化：將步驟一中所制得的臍帶塊加入0.1％膠原酶Ⅱ消化30～35分鐘，然后再加入0.25％胰酶進行消化30～35分鐘；
步驟三：離心：將步驟二中的溶液倒入離心機中，離心機離心20～25分鐘，然后取中間白膜層，并且加入PBS洗滌2次；
步驟四：培養：將步驟三洗滌后的細胞接種于20％～40％胎牛血清培養液Ⅰ中，然后置于37℃、5％二氧化碳和飽和濕度的培養箱中進行培養，靜置2～3天；
步驟五：培養液更換：將步驟四中靜置2～3天后的培養液Ⅰ內的培養液進行更換，并且去除非貼壁細胞，同時每隔2～3天進行換液一次；
步驟六：消化：在步驟五進行之后，將培養液放置于顯微鏡下觀察，當觀測到待貼壁細胞80％～90％后，加入0.25％胰酶消化；
步驟七：傳代培養：用吸管從步驟六消化后的溶液中吸取適量的細胞，并且以2*10
2.根據權利要求1所述的一種體外擴增和規模化培養間充質干細胞的方法，其特征在于：步驟一中臍帶為剛剛出生的新生兒所產生的臍帶，剪刀經過300℃～500℃高溫滅菌去除剪刀表面的細菌。
3.根據權利要求1所述的一種體外擴增和規模化培養間充質干細胞的方法，其特征在于：步驟二中是在無菌條件下進行。
4.根據權利要求1所述的一種體外擴增和規模化培養間充質干細胞的方法，其特征在于：步驟三中離心機以2000r/min進行離心運動。
5.根據權利要求1所述的一種體外擴增和規模化培養間充質干細胞的方法，其特征在于：步驟四和步驟七中胎牛血清培養液中還含有100kU/L青霉素和100mg/L鏈霉素。
6.根據權利要求1所述的一種體外擴增和規模化培養間充質干細胞的方法，其特征在于：步驟五中的處理的非貼壁細胞通過收集箱進行集中收集。
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