[發明專利]一種三價卵黃抗體口服液的制備方法

在審

• 申請號: 201810114766.0
• 申請日: 2018-02-06
• 公開（公告）號: CN110115762A
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 杜新永;劉軍偉;趙立媛;張敏
• 申請（專利權）人: 青島潤達生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61K9/08;A61P31/20
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 陳圣清

1.一種三價卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于，步驟如下：

（1）選取無特定病原體蛋雞在潔凈養殖場隔離飼養，對蛋雞進行3次免疫，每次給每只雞注射小鵝瘟、番鴨細小、鴨大舌病三價疫苗注射劑量分別為（0.6-0.8mL）、（1.0-1.4mL）、（2.2-2.6mL），每次間隔15天；

（2）完成第3次免疫21天后，收集雞蛋，對卵黃中的卵黃抗體進行免疫學檢測，小鵝瘟、番鴨細小、鴨大舌病的卵黃抗體瓊脂擴散效價達到1:16以上的雞蛋為小鵝瘟、番鴨細小、鴨大舌病病毒高免雞蛋，收集貯存在16℃條件下備用；

（3）將步驟（2）所得高免蛋用0.2%的碘液消毒10min，打碎，取出卵黃，加入卵黃重量6-8倍的蒸餾水，并調整pH值至5.2-5.8，攪拌15-25分鐘，在6℃條件下，靜置8-14小時，調整離心機轉速為3000-4000r/min，離心10-20分鐘，取上清液，備用；

（4）將步驟（3）所得上清液加入滅菌的容器中，用無菌生理鹽水稀釋0.5-0.8倍，再加入與上清液等體積的氯仿-甲醇混合溶液，其中氯仿和甲醇的體積比為10:1，充分震蕩后，于28-36℃水浴40-60分鐘，其間攪拌3-5次，取出，于1500-2500r/min轉速下離心25-35分鐘，樣品分三層，最上層溶液為卵黃抗體水溶液，取出，備用；

（5）將卵黃抗體水溶液進行微孔過濾，然后依次加入pH6.6的PBS液和硫柳汞，其中卵黃抗體水溶液：PBS液：硫柳汞的體積比為（0.7-0.9）：（0.04-0.06）：（0.001-0.002），混勻，用蠟密封，置于4℃冷藏保存，即得。

2.根據權利要求1所述的三價卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于，步驟（3）加入卵黃重量7倍的蒸餾水。

3.根據權利要求1所述的三價卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于，步驟（3）調整pH值至5.5。

4.根據權利要求1所述的三價卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于，步驟（4）用無菌生理鹽水稀釋0.7倍。

5.根據權利要求1所述的三價卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于，步驟（4）于32℃水浴50分鐘。

6.根據權利要求1所述的三價卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于，步驟（4）于2000r/min轉速下離心30分鐘。