[發(fā)明專利]一種用于鑒定弓形蟲的LAMP引物組合及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810113529.2
• 申請日: 2018-02-05
• 公開（公告）號: CN110117591A
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陶勇
• 申請（專利權(quán)）人: 北京智德醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/04
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

本發(fā)明公開了一種用于鑒定弓形蟲的LAMP引物組合及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的LAMP引物組合，由序列1至序列6所示的6種DNA分子組成。所述引物組合可應(yīng)用于鑒定待測寄生蟲是否為弓形蟲，可應(yīng)用于檢測待測樣本是否感染了弓形蟲。本發(fā)明提供的引物組合用于鑒定弓形蟲，具有高特異性和高靈敏度，可以實(shí)現(xiàn)簡便、快速、準(zhǔn)確檢測。本發(fā)明具有重大的推廣價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于鑒定弓形蟲的LAMP引物組合及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

弓形蟲(Toxoplasma)是一種可感染廣泛宿主的寄生原蟲。眼弓形蟲病是由弓形蟲感染所致的一種致盲性眼病，是世界范圍內(nèi)引起免疫健全人群感染性脈絡(luò)膜炎最重要的原因。弓形蟲(Toxoplasma Gondii)也叫三尸蟲，是細(xì)胞內(nèi)寄生蟲。寄生于細(xì)胞內(nèi)，隨血液流動，到達(dá)全身各部位，破壞大腦、心臟、眼底，致使人的免疫力下降，患各種疾病。它是專性細(xì)胞內(nèi)寄生蟲，屬于球蟲亞綱、真球蟲目、等孢子球蟲科、弓形體屬。

目前臨床針對弓形蟲的檢測方法主要是涂片鏡檢和血清學(xué)診斷。這些檢測方法繁瑣，檢測時間長，靈敏度低，容易發(fā)生漏檢和錯檢，無法滿足快速檢測的要求。近幾年發(fā)展起來的分子檢測技術(shù)，特別是PCR技術(shù)，在微生物快速鑒定和檢測方面的應(yīng)用，為寄生蟲的快速檢測開辟了新的途徑。但是，PCR存在檢測時間長、易污染、假陽性率高的缺點(diǎn)，使其應(yīng)用受到限制。

環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是近年來發(fā)展出的一種敏感、特異、簡便、快捷的核酸擴(kuò)增技術(shù)，其原理是在一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶的作用下，識別6-8個區(qū)域的4-6條引物，在等溫條件下快速、特異地擴(kuò)增目的基因，可推廣應(yīng)用于快速、準(zhǔn)確的檢測寄生蟲。LAMP技術(shù)中，引物是決定檢測結(jié)果靈敏度和特異性的關(guān)鍵因素。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是鑒定弓形蟲或檢測被弓形蟲感染的樣本。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了引物組合，可包括引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物L(fēng)F和引物L(fēng)B。

所述引物F3可為如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

(a2)將序列1經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子。

所述引物B3可為如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(a4)將序列2經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子。

所述引物FIP可為如下(a5)或(a6)：

(a5)序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；

(a6)將序列3經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列3具有相同功能的DNA分子。

所述引物BIP可為如下(a7)或(a8)：

(a7)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；

(a8)將序列4經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子。

所述引物L(fēng)F可為如下(a9)或(a10)：

(a9)序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；

(a10)將序列5經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列5具有相同功能的DNA分子。

所述引物L(fēng)B可為如下(a11)或(a12)：