[發明專利]一種用于鑒定弓形蟲的LAMP引物組合及其應用

在審

• 申請號: 201810113529.2
• 申請日: 2018-02-05
• 公開（公告）號: CN110117591A
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 陶勇
• 申請（專利權）人: 北京智德醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/04
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.引物組合，包括引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LF和引物LB；

所述引物F3為如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

(a2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物B3為如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(a4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物FIP為如下(a5)或(a6)：

(a5)序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；

(a6)將序列3經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列3具有相同功能的DNA分子；

所述引物BIP為如下(a7)或(a8)：

(a7)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；

(a8)將序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子；

所述引物LF為如下(a9)或(a10)：

(a9)序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；

(a10)將序列5經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列5具有相同功能的DNA分子；

所述引物LB為如下(a11)或(a12)：

(a11)序列表的序列6所示的單鏈DNA分子；

(a12)將序列6經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列6具有相同功能的DNA分子。

2.如權利要求1所述的引物組合，其特征在于：所述引物組合由所述引物F3、所述引物B3、所述引物FIP、所述引物BIP、所述引物LF和所述引物LB組成。

3.權利要求1或2所述引物組合的應用，為(b1)或(b2)：

(b1)鑒定弓形蟲；

(b2)制備用于鑒定弓形蟲的試劑盒。

4.權利要求1或2所述引物組合的應用，為(b3)或(b4)：

(b3)鑒定待測寄生蟲是否為弓形蟲；

(b4)制備用于鑒定待測寄生蟲是否為弓形蟲的試劑盒。

5.權利要求1或2所述引物組合的應用，為(b5)或(b6)：

(b5)檢測待測樣本是否感染了弓形蟲；

(b6)制備用于檢測待測樣本是否感染了弓形蟲的試劑盒。

6.含有權利要求1或2所述引物組合的試劑盒；所述試劑盒的用途為(b1)或(b3)或(b5)：

(b1)鑒定弓形蟲；

(b3)鑒定待測寄生蟲是否為弓形蟲；

(b5)檢測待測樣本是否感染了弓形蟲。

7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還含有重組質粒；所述重組質粒為向pGEM-T Easy Vector的限制性內切酶ApaⅠ和SacⅠ之間插入序列表中序列7所示的雙鏈DNA分子得到的。

8.權利要求6或7所述試劑盒的制備方法，包括將各條引物單獨包裝的步驟。

9.一種鑒定待測寄生蟲是否為弓形蟲的方法，包括如下步驟：

(1)提取待測寄生蟲的基因組DNA；

(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，采用權利要求1或2所述引物組合進行環介導等溫擴增，然后進行如下判斷：

如果采用所述引物組合可以實現以所述基因組DNA為模板的特異性擴增，待測寄生蟲為或候選為弓形蟲；如果采用所述引物組合不可以實現以所述基因組DNA為模板的特異性擴增，待測寄生蟲不為或候選不為弓形蟲。

10.一種檢測待測樣本是否感染了弓形蟲的方法，包括如下步驟：

(1)提取待測樣本的總DNA；

(2)以步驟(1)提取的總DNA為模板，采用權利要求1或2所述引物組合進行環介導等溫擴增，然后進行如下判斷：

如果采用所述引物組合可以實現以所述總DNA為模板的特異性擴增，待測樣本感染了或疑似感染了弓形蟲；如果采用所述引物組合不可以實現以所述總DNA為模板的特異性擴增，待測樣本未感染或疑似未感染弓形蟲。