[發明專利]一種帶有綠色熒光蛋白標簽的非洲爪蟾卵母細胞表達載體pGH19-EGFP及應用在審
| 申請號： | 201810109496.4 | 申請日： | 2018-02-05 |
| 公開（公告）號： | CN110117612A | 公開（公告）日： | 2019-08-13 |
| 發明（設計）人： | 趙春青;盛成旺;賈忠強;黃秋堂;韓召軍;劉澤文 | 申請（專利權）人： | 南京農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/65;C12N15/66;G01N33/68;C07K1/14 |
| 代理公司： | 南京天華專利代理有限責任公司 32218 | 代理人： | 杜靜;徐冬濤 |
| 地址： | 211225 江蘇省南京市溧*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 非洲爪蟾卵母細胞表達 綠色熒光蛋白 標簽 檢測 增強型綠色熒光蛋白 分子生物學手段 共聚焦顯微鏡 綠色熒光標簽 功能性分析 熒光顯微鏡 靶標蛋白 表達模式 蛋白表達 經濟成本 目的蛋白 目的基因 時空動態 實時觀察 實驗流程 靶蛋白 通用型 抗體 可用 質粒 應用 蛋白 直觀 改造 開發 | ||
1.一種帶有綠色熒光蛋白標簽的非洲爪蟾卵母細胞表達載體pGH19-EGFP，其特征在于該載體為帶有修飾序列的EGFP基因連接到pGH19質粒上獲得；所述帶有修飾序列的EGFP基因為EGFP基因5’端加入限制性內切酶A的識別堿基序列和一段人工設計的酶切位點堿基序列，及3’端自身攜帶的限制性內切酶B的識別堿基序列。
2.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于所述人工設計的酶切位點堿基序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于所述限制性內切酶A為EcoR I限制性內切酶、Xma I限制性內切酶、Sma I限制性內切酶、BamH I限制性內切酶、BstB I限制性內切酶、Xho I限制性內切酶或EcoR V限制性內切酶。
4.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于所述限制性內切酶A的堿基識別序列選自SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9。
5.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于所述限制性內切酶B為Xba I限制性內切酶、BsrG I限制性內切酶、PspOM I限制性內切酶、Apa I限制性內切酶、BmgB I限制性內切酶或BstP I限制性內切酶。
6.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于所述限制性內切酶B的堿基識別序列選自SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14或SEQ IDNO.15。
7.一種帶有綠色熒光標簽的非洲爪蟾卵母細胞表達載體pGH19-EGFP，其特征在于該載體的堿基序列如SEQ ID NO.1所示。
8.一種權利要求1～7任一項表達載體中插入目的基因形成的基因表達載體。
9.權利要求1～7任一項表達載體或權利要求8所述基因表達載體在生物檢測中的應用。
10.權利要求1～7任一項表達載體或權利要求8所述基因表達載體在實時觀察蛋白表達動態或蛋白純化或檢測中的應用。
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