[發明專利]一種高效的基因工程載體

在審

• 申請號: 201810108390.2
• 申請日: 2018-02-02
• 公開（公告）號: CN110129346A
• 公開（公告）日: 2019-08-16
• 發明（設計）人: 姜有為;李云飛
• 申請（專利權）人: 杭州菁因康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N1/15;C12N15/90
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;徐迅

1.一種核苷酸構建物，所述核苷酸構建物具有以下所示的I類結構：

5’H-T-F-GOI-3’H；

5’H-T-GOI-F-3’H；

5’H-F-T-GOI-3’H；

5’H-F-GOI-T-3’H；

5’H-GOI-T-F-3’H；

5’H-GOI-F-T-3’H；

5’H-F-GOI-3’H；

5’H-GOI-F-3’H；

其中，

T是外源性終止子；

F為B-C-Marker-B所示基因片段；其中B是位點特異性重組位點；C是所述位點特異性重組位點相對應的重組酶表達盒；Marker是標記基因表達盒；

GOI是外源基因表達盒；

或者，

所述核苷酸構建物具有以下所示的II類結構：

5’H-F-GOI-P-3’H；

5’H-GOI-F-P-3’H；

5’H-P-F-GOI-3’H；

5’H-P-GOI-F-3’H；

5’H-F-P-GOI-3’H；

5’H-GOI-P-F-3’H；

5’H-F-GOI-3’H；

5’H-GOI-F-3’H；

其中，

P是外源性啟動子；

F、B、C、Marker和GOI如上所述。

2.如權利要求1所述的核苷酸構建物，所述核苷酸構建物具有以下所示的I類結構：

5’H-T-F-GOI-3’H；

5’H-T-GOI-F-3’H；

5’H-F-T-GOI-3’H；

5’H-F-GOI-T-3’H；

5’H-GOI-T-F-3’H；

5’H-GOI-F-T-3’H；

其中，T、F、GOI如權利要求1所述；

或者，

所述核苷酸構建物具有以下所示的II類結構

5’H-F-GOI-P-3’H；

5’H-GOI-F-P-3’H；

5’H-P-F-GOI-3’H；

5’H-P-GOI-F-3’H；

5’H-F-P-GOI-3’H；

5’H-GOI-P-F-3’H；

其中，P、F和GOI如權利要求1所述。

3.如權利要求1或2所述的核苷酸構建物，其特征在于，所述轉錄終止子包括但不限于：釀酒酵母的ADH1、CYC1和TIF51A等轉錄終止子，畢赤酵母的ALG6、AOD、AOX1、ARG4、PMA1和TEF1等轉錄終止子；

轉錄啟動子包括但不限于：釀酒酵母的ADH1、GAP、PGK1和TEF1等轉錄啟動子，畢赤酵母的GAP、ILV5、PGK1、TEF1等轉錄啟動子，誘導啟動子AOX1和FLD1等；

所述位點特異性重組位點以及相應的重組酶構成位點特異性重組系統，包括但不限于釀酒酵母的Flp-FRT，細菌噬菌體P1的Cre-loxP和Xygosaccharomyces rouxii的R-RS；

標記基因包括一個或多個抗生素耐受性基因，優選耐受博萊霉素(zeocin)的Shble基因，和耐受卡那霉素(kanamycin，kan)或遺傳霉素(geneticin，G418)的neo基因，耐受殺稻瘟菌素(Blasticidin)的BSD基因等。

4.如權利要求1或2所述的核苷酸構建物，其特征在于，所述重組酶包括但不限于Flp重組酶或Cre重組酶；優選Flp重組酶。

5.如權利要求1或2所述的核苷酸構建物，其特征在于，所述核苷酸構建物在5’端和3’端還包含同源臂。

6.如權利要求1-5中任一項所述的核苷酸構建物，其特征在于，所述核苷酸構建物還可以包含當所述核苷酸構建物形成環狀時，能夠在宿主細胞(例如，細菌)中復制所需的其它基因X，優選細菌復制起點和抗生素耐受性基因；并且當所述核苷酸構建物形成線形構建物時，所述其它基因X的位置在所述核苷酸構建物的B之間的任何位置。