[發明專利]人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201810108148.5
• 申請日: 2018-02-02
• 公開（公告）號: CN108218982A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 陳偉杰;陳風華;王宇
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C07K16/06;C07K1/22;G01N33/569
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 劉瑜;蘇運貞

1.一種人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體，其特征在于：以UL148重組融合蛋白為抗原對兔子進行免疫得到血清，然后將血清經過純化處理后獲得。

2.根據權利要求1所述的人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體，其特征在于：

所述的免疫為3次免疫，包括初次免疫和第一、二次加強免疫；

所述的初次免疫為采用UL148重組蛋白與弗氏完全佐劑乳化后形成的抗原進行免疫；

所述的第一、第二次加強免疫為采用UL148重組蛋白與弗氏不完全佐劑乳化后形成的抗原進行免疫。

3.根據權利要求1所述的人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體，其特征在于：

所述的UL148重組蛋白溶液與弗氏完全佐劑的體積比為1:1；

所述的UL148重組蛋白溶液與不弗氏完全佐劑的體積比為1:1。

4.根據權利要求1所述的人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體，其特征在于：所述的兔子為新西蘭大白兔。

5.根據權利要求1所述的人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體，其特征在于：所述的純化處理為采用親和層析法進行純化處理。

6.權利要求1～5任一項所述的人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)免疫動物

①初次免疫：將400μg UL148重組融合蛋白與等體積的弗氏完全佐劑乳化后，選擇兔子脊柱兩旁的數點進行皮下注射，每點注射200μl；

②第一次加強免疫：在初次免疫2周后，將200μg UL148重組蛋白與等體積的弗氏不完全佐劑乳化后，選擇兔子脊柱兩旁的數點進行皮下注射，每點注射200μl；

③第二次加強免疫：在第一次加強免疫2周后，重復步驟②的操作；

(2)分離血清

第二次加強免疫2周后，采集兔全血，得到UL148重組蛋白的兔抗血清；

(3)UL148重組蛋白的多克隆抗體純化

采用親和層析法對步驟(2)中獲得的兔抗血清進行純化，得到人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體。

7.根據權利要求6所述的人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體的制備方法，其特征在于，在步驟(1)④之后還包括用ELISA法測效價的步驟，具體為：第二次加強免疫2周后，收集兔血，用ELISA法測效價。

8.根據權利要求6所述的人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體的制備方法，其特征在于：還包括將步驟(3)中經親和層析法純化后的人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體進行透析的步驟；

所述的透析的條件為：在0.01M PBS緩沖液中透析過夜。

9.權利要求1～5任一項所述的人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體在制備HCMV診斷試劑盒、或HCMV蛋白檢測試劑盒中的應用。