[發明專利]人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201810108148.5
• 申請日: 2018-02-02
• 公開（公告）號: CN108218982A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 陳偉杰;陳風華;王宇
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C07K16/06;C07K1/22;G01N33/569
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 劉瑜;蘇運貞

本發明公開了一種人巨細胞病毒anti?UL148多克隆抗體及其制備方法與應用。該人巨細胞病毒anti?UL148多克隆抗體是以UL148重組融合蛋白為抗原對兔子進行免疫得到血清，然后將血清經過純化處理后獲得。本發明中制備得到的多克隆抗體純度更高、特異性強，用UL148重組蛋白檢測多克隆抗體的特異性，Western blot結果顯示，感染了HCMV的HFF細胞，經Western blot檢測到UL148基因的表達；該多克隆抗體可以特異性的識別大小約54.5kDa的UL148重組蛋白。本發明中的多克隆抗體可以用于HCMV診斷試劑盒、HCMV相關蛋白檢測試劑盒的開發。

技術領域

本發明屬于醫學技術領域，特別涉及一種人巨細胞病毒anti-UL148多克隆抗體及其制備方法與應用。

背景技術

巨細胞病毒是一種古老的病毒，可以感染大多數的脊椎動物，但每種特定的巨細胞病毒只感染一個物種，幾乎沒有證據表明巨細胞病毒可以在不同物種之間交叉感染。人類巨細胞病毒，具有大型雙鏈DNA皰疹病毒基因組，可以使大多數人類終生感染。大多數人感染人巨細胞病毒會導致輕微的發熱性疾病，但是在免疫功能不全的病人或新生兒中導致嚴重的癥狀。幾乎所有感染了人巨細胞病毒后會在整個身體中廣泛傳播，如上皮細胞、內皮細胞、成纖維細胞和平滑肌細胞等不同的細胞類型都會產生高效的病毒感染。此外，病毒誘發大量的免疫調節通路去破壞宿主先天和適應性反應。

在世界人口當中，人類巨細胞病毒是無處不在的。而感染了人類巨細胞病毒的人群，一般來說，在健康個體中常表現為無癥狀，但它可能在免疫功能低下的患者中，如移植受者免疫抑制，導致嚴重的疾病。人巨細胞病毒也被認為是子宮內病毒感染的主要發生原因，據估計，在美國大約有0.64％的孕婦會感染人巨細胞病毒。先天性感染了人巨細胞病毒后可能會發生原發性感染，比如在人類巨細胞病毒血清反應呈陰性感染的母親或HCMV血清反應呈陽性感染女性中會發生。受孕前的女性在感染了天然的人類巨細胞病毒后會產生母源性免疫，這樣會使受孕女性將病毒傳播給胎兒的風險降低了69％。此外，血清反應陽性的婦女和孩子可防止再次感染人巨細胞病毒。這些結果表明，在水平和垂直方向傳播時，天然免疫是預防人巨細胞病毒的一種很好的保護措施，這一觀點已被采納用于人類巨細胞病毒減毒活疫苗的設計和開發，如Towne疫苗。然而，已經獲得天然免疫的人并不能夠完全預防再次感染人巨細胞病毒。健康的血清反應呈陽性的女性可再次獲得繼發性感染，基于病毒傳染或依據血清學反應抗原所做出的診斷，不同于之前，由人巨細胞病毒所引起的感染。重要的是,再次感染的女性依然會導致先天性傳播，先天性感染出生的孩子可能患有類似的后遺癥,但通常好過那些由初次感染產婦所引起的孩子。可能是由于宿主細胞免疫缺陷，造成了天然免疫所產生不完整的保護，例如移植受者的免疫抑制。最后，因自然免疫而產生的抗病毒抗體可能具有病毒株型的特異性，在這種條件下，孕前的母源性免疫，可能無法對先天性的不同人巨細胞病毒株的傳播進行有效的防治。理解抗體反應的防治范圍對于該病毒疫苗的研發與應用，具有很重要的指導意義。

人巨細胞病毒是一種雙鏈DNA病毒，它的基因組可以編碼至少20種糖蛋白。人巨細胞病毒在侵染細胞時需要多種糖蛋白復合物的共同作用。糖蛋白gB是一類融合蛋白。糖蛋白gB的膜融合必須與糖蛋白gH和gL一起發揮作用。由gO、gH、gL所構成的三聚體復合物，介導人巨細胞病毒侵染成纖維細胞，也有研究認為gO/gH/gL可能參與病毒侵染所有細胞類型。由gH/gL和UL128、UL130、UL131所組成的五聚體復合物介導病毒侵染上皮細胞、內皮細胞、白細胞，而這一過程很可能是通過受體介導的細胞內吞作用來實現的。體外純化單克隆抗體揭示了兩類抗病毒抗體的特點:一種抗體中和感染了的上皮細胞，它主要識別的抗原表位位于五聚體復合物上，而另一種抗體中和感染了的成纖維細胞和上皮細胞，識別抗原表位位于gB或gH/gL/gO三聚體復合物上。