[發明專利]一種微小型昆蟲復眼的透射電鏡樣品制片方法

在審

• 申請號: 201810107594.4
• 申請日: 2018-02-02
• 公開（公告）號: CN108375599A
• 公開（公告）日: 2018-08-07
• 發明（設計）人: 羅雪君;閆凱莉;唐良德;吳建輝
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: G01N23/2202
• 分類號: G01N23/2202
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

本發明公開了一種微小型昆蟲復眼的透射電鏡樣品制片方法，包括如步驟：S1.蟲體清洗；S2.取樣；S3.固定、漂洗；S4.再固定、漂洗；S5.脫水、置換；S6.滲透浸樣；S7.聚合干燥；S8.定位、切片、撈片烤干；S9.染色、觀察。本發明基于現有制樣方法，在操作和處理方式上針對微小型昆蟲組織特點進行改良。使用該方法制得的樣品經透射電鏡電鏡觀察，小眼超微結構清晰完整，無明顯缺損、內容物丟失、變形等，說明該法適用于微小型昆蟲復眼的透射電鏡樣品制片，尤其適用于薊馬復眼透射電鏡樣品的制片。

技術領域

本發明涉及生物樣品制備技術領域，更具體地，涉及一種微小型昆蟲復眼的透射電鏡樣品制片方法。

背景技術

薊馬是纓翅目（Thysanotpera）昆蟲的統稱，體長約0.5～5 mm，屬于微小型昆蟲，根據食性可以分為菌食性、捕食性、植食性三類。許多植食性薊馬都是重要的農林類害蟲，比如西花薊馬、普通大薊馬、花薊馬、稻薊馬等。薊馬類害蟲為害猖獗，由于其體型微小，隱蔽性強，繁殖力極強，噴施殺蟲劑的常規化學防治方法無法達到好的防效，反而使許多地區的薊馬種群產生了不同程度的抗藥性，并且造成嚴重的污染和食物殘留問題。因此，環境友好的物理防治日益受研究者們關注。對害蟲的物理防治措施一般從昆蟲趨性入手，除了行為學研究，從蟲體感覺器官入手解讀昆蟲感受機制是深入研究不可缺少的環節。復眼是昆蟲重要的感光器官，是昆蟲趨光行為、趨色行為的生理結構基礎。明確昆蟲復眼結構，從而了解復眼實現其功能的運作機制是研究昆蟲趨光性、趨色性的基本要求。

國內對薊馬復眼結構的研究較少，對復眼外部結構的觀察主要運用掃描電鏡技術，對小眼的內部基礎結構則主要通過光學顯微鏡觀察石蠟切片實現。研究表明，薊馬的復眼為并列像眼，小眼的一般結構自外向內由角膜、晶錐、視桿、基膜組成。目前研究最為深入的是西花薊馬，研究者運用掃描電鏡技術明確了西花薊馬復眼外部結構，而內部結構研究止步于使用光學顯微鏡觀察石蠟切片明確小眼顯微結構。尚未有運用透射電鏡技術研究薊馬復眼超微結構的報道，亦沒有針對薊馬復眼的透射電鏡樣品制片方法的報道。

昆蟲復眼由一系列視覺細胞特化而成，內部與視神經相連，是非常精密的結構。復眼最外側是角膜細胞分泌形成的角膜，由多層平行的片狀纖維結構組成。由于沒有昆蟲體壁保護，復眼組織相對比較脆弱，但在制片時固定液更容易滲透。對復眼形態和內部結構的固定、內容物的保存是制作復眼的透射電鏡樣品時應考慮的首要因素。現有的昆蟲復眼透射電鏡樣品制片方法主要針對體型適中的鱗翅目、直翅目、半翅目等昆蟲，直接取用昆蟲復眼進行制片，操作中主要使用尖頭鑷子和解剖剪。而薊馬等微小型昆蟲復眼極小，直接取復眼進行制片難度極大，并且樣品過于微小，操作時很容易丟失樣品或是對組織結構造成損傷，不適用于薊馬等微小型昆蟲復眼透射電鏡樣品的制片。

對此，本發明提出一種經檢驗有效的復眼透射電鏡樣品的制片方法，可運用于微小型昆蟲，尤其是薊馬的復眼透射電鏡樣品的制片。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有昆蟲復眼透射電鏡樣品制片方法無法適用于微小型昆蟲的缺陷和不足，提出一種微小型昆蟲復眼的透射電鏡樣品制片方法，尤其是一種薊馬復眼的透射電鏡樣品制片方法。本方法在現有的昆蟲復眼及觸角透射電鏡樣品制片方法的技術上做了針對性改良，使操作方法、處理方式更加適合微小型昆蟲復眼樣品的制片，尤其更加適合薊馬復眼樣品的制片。

本發明的目的是提供一種微小型昆蟲復眼的透射電鏡樣品制片方法。

本發明的上述目的是通過以下技術方案給予實現的：

一種微小型昆蟲復眼的透射電鏡樣品制片方法，包括如下步驟：

S1.蟲體清洗：挑取活蟲樣本，常溫清洗；

S2.取樣：在解剖鏡下迅速切取蟲體頭部，獲得樣品；