[發明專利]一種基于雙水相系統提取體液中胞外囊泡的方法

有效

• 申請號: 201810107478.2
• 申請日: 2018-02-02
• 公開（公告）號: CN108362535B
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發明（設計）人: 趙立波;孔關義;楊玉清;謝琪琪
• 申請（專利權）人: 北京恩澤康泰生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.一種基于雙水相系統提取體液中胞外囊泡的方法，其特征在于，包括向體液樣本中加入聚乙二醇和葡聚糖，通過加入緩沖溶液調節體系的pH值為6.81±0.3或8.07±0.4，充分混合后震蕩，形成白色乳濁液；然后離心，將溶液分為上下兩層，棄掉上層聚乙二醇相，將界面附近液體及底部葡聚糖相取出，進一步地加入適量磷酸鹽緩沖液；分離得到胞外囊泡；

其中，所述緩沖溶液為pH為6.3-8.5的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液；

所述體系中聚乙二醇和葡聚糖的質量分數分別為6％和1％，或5％和1.5％；

所用聚乙二醇分子量為35,000，所用葡聚糖分子量450,000-650,000；

所述體液樣本為人或動物的血漿；

將所述體液樣本用磷酸鹽緩沖液稀釋1-4倍后再提取其中的胞外囊泡。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，調節體系的pH值為6.81或8.07。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)向體液樣本中加入聚乙二醇溶液和葡聚糖溶液，通過加入所述緩沖溶液調節體系的pH值為6.81或8.07；

2)充分混合后劇烈震蕩，形成白色乳濁液；

3)室溫下1500×g離心10分鐘后，棄掉上層聚乙二醇相，將界面附近液體及底部葡聚糖相取出，或者，便得到富集后的胞外囊泡。