[發明專利]豬A型產氣莢膜梭菌滅活疫苗的快速高效制備方法

有效

• 申請號: 201810105934.X
• 申請日: 2018-02-02
• 公開（公告）號: CN108273051B
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 楊耀光;張俊清;郝俊飛;屈建平;楊耀軍;黃建華;邵春華
• 申請（專利權）人: 鄂爾多斯市旭和畜牧有限責任公司
• 主分類號: A61K39/08
• 分類號: A61K39/08;A61K39/39;A61P31/04
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 劉俊玲

本發明屬于獸用生物制品技術領域，涉及一種豬A型產氣莢膜梭菌滅活疫苗的快速高效制備方法。包括以下步驟：挑取A型產氣莢膜梭菌致死病豬的病料，刮取腸道內容物，冷藏或冷凍；將培養基在高壓鍋內高壓滅菌，待到溫度降低后，把病料倒入高壓鍋內，厭氧培養，傳代3次；取三次傳代的菌液接入肉肝胃膜消化湯培養，培養結束后離心，取上清液；向上清液加入滅活劑，充分振搖，滅活脫毒，得滅活菌液；將滅活菌液與佐劑混合，得滅活疫苗。本發明提供的方法工藝簡單、成本低、污染小，制備出的滅活疫苗安全性高，注射后無不良反應，免疫效力高、免疫期長。

技術領域

本發明屬于獸用生物制品技術領域，具體涉及一種豬A型產氣莢膜梭菌滅活疫苗的快速高效制備方法。

背景技術

產氣莢膜梭菌又稱魏氏梭菌，可產生多種外毒素及酶類，能分解肌肉和結締組織中的糖，產生大量氣體，導致組織嚴重氣腫，繼而影響血液供應，造成組織大面積壞死。根據產氣莢膜梭菌所合成分泌的主要毒素，分為A、B、C、D、E五種毒素型；其中A型產氣莢膜梭菌主要引起胃腸道的病變，是人畜氣性壞疽病，兔梭菌性下痢，馬壞死性腸炎及人食物中毒的主要致病菌，也是引起鹿出血性腸炎的主要致病菌。該型菌產生的多種外毒素中，最主要的是α毒素。豬A型產氣莢膜梭菌是造成仔豬、育肥豬、懷孕母豬以及種豬“猝死”的主要原因，以胃腸道彌漫性出血而引起的腸毒血癥和壞死性腸炎為特征，發病急，病程短，無任何前期征兆而突然死亡。

目前，產氣莢膜梭菌滅活疫苗的也有較多的研究，中國專利申請CN102698259A公開了一種雞壞死性腸炎(A型)滅活疫苗制備方法，將A型產氣莢膜梭菌CVCC37株種子液按培養基總量的1％-2％接種于以胰酪蛋白胨和酵母浸出粉為主要原材料的液體合成培養基中，37℃厭氧發酵培養/或靜置培養6小時，培養結束后經3000r/min離心30min去除菌體，分別用8Ku截留分子量的millipore超濾濃縮系統進行超濾濃縮，經0.6％的甲醛溶液滅活脫毒完全后，加入終濃度20％額氫氧化鋁配制成疫苗。中國專利申請CN104623651A公開了一種家兔魏氏梭菌病的A型產氣莢膜梭菌滅活疫苗的制備方法，該方法以A型產氣莢膜梭菌為原始菌種，經過一級和二級培養后最終獲得菌液，將該菌液與白油佐劑混合即制得A型產氣莢膜梭菌滅活疫苗；其中，所用滅活劑為最終質量分數為0.3％的甲醛，佐劑為白油佐劑。曲海波等([1]曲海波,劉洪斌,白同臣.A型產氣莢膜梭菌類毒素疫苗與全菌滅活疫苗的安全性和免疫效力的比較研究[J].中國獸藥雜志,2010,44(02):15-16.)研究了六批兔A型產氣莢膜梭菌類毒素疫苗和其全菌滅活疫苗，并且對其安全性和免疫效力進行了比較研究；結果表明，類毒素滅活疫苗無毒副作用，局部刺激小，安全性好于全滅活疫苗，免疫效力結果二者無明顯差異，兩種疫苗的攻毒保護率均不低于4/5，免疫期均在6個月以上；其中滅活劑采用0.4％的甲醛溶液，佐劑采用氫氧化鋁膠。

目前，A型產氣莢膜梭菌滅活疫苗的研究針對的牲畜多為鹿、兔、牛，針對豬A型莢膜梭菌滅活疫苗的研究較少，而且簡單的替換并不能得到安全性好、穩定性高、免疫效果好的豬疫苗，并且現有技術中產氣莢膜梭菌的滅活試劑采用的是有致癌效果的甲醛，佐劑多采用含有重金屬的氫氧化鋁膠。這些疫苗在使用中尚存在一些需要進一步解決的問題：(1)家畜接種反應較重；(2)注射劑量大，使用多有不便(3)制備過程繁瑣，時間較長。因此，需要改進制備過程和篩選培養基和佐劑，以快速制備出高效的疫苗，來提高疫苗免疫原性和集體免疫應答水平。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對上述缺陷，提供豬A型產氣莢膜梭菌滅活疫苗的快速高效制備方法。該方法簡便可行、操作簡單、成本低、污染小，制備出的滅活疫苗安全性高，注射后無不良反應，免疫效力高、免疫期長。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種豬A型產氣莢膜梭菌滅活疫苗的快速高效制備方法，包括以下步驟：

(1)病原菌的獲?。禾羧型產氣莢膜梭菌致死病豬的病料，刮取腸道內容物，冷藏或冷凍；