[發明專利]一種利用姜黃素抑制肝癌的新靶點及用途

在審

• 申請號: 201810103392.2
• 申請日: 2018-02-01
• 公開（公告）號: CN108324702A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發明（設計）人: 任碧瓊;羅書笛;鄒國英
• 申請（專利權）人: 任碧瓊
• 主分類號: A61K31/12
• 分類號: A61K31/12;A61P35/00;C12N5/09;C12Q1/02
• 代理公司: 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙) 50230
• 代理人: 包曉靜

本發明屬于醫療技術領域，公開了一種利用姜黃素抑制DAMP分子HSP70及TLR4信號抑制肝癌的新靶點及用途，通過細胞培養與細胞熱應激模型的建立，CCK?8試驗，劃痕實驗，Transwell遷移實驗，流式細胞儀細胞周期分析，流式細胞儀細胞凋亡分析，Western blot分析，酶聯免疫吸附試驗等方法，進行統計分析。表明熱應激顯著增加細胞外HSP70的水平和TLR4蛋白的表達，顯著降低細胞內HSP70的表達；姜黃素抑制人肝癌細胞系HepG2細胞的增殖、侵襲和轉移，促進細胞凋亡，使細胞阻滯于S期，并顯著降低熱應激HepG2細胞外HSP70(eHSP70)水平，去除姜黃素后，eHSP70再次增加。

技術領域

本發明屬于醫療技術領域，尤其涉及一種利用姜黃素抑制DAMP分子 HSP70及TLR4信號抑制肝癌的新靶點及用途

背景技術

姜黃素具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤、甚至抗神經變性等特性，已被廣泛報道。姜黃素的作用機制尚不清楚，尤其是在抑制肝癌方面。然而，活化的NF-κB信號通路與肝癌進展有關，HSP70可以與TLR4受體結合激活NF- κB。免疫學“危險理論”表明DAMPs與炎癥、自身免疫性疾病、腫瘤以及各種老化疾病相關，細胞外HSP70是典型的DAMP分子，能作為內源性免疫刺激因子刺激免疫系統產生免疫應答。許多與衰老有關的疾病都有著共同的起源和特點，如基因組改變，端粒和表觀遺傳學異常，炎癥和免疫損傷，因此，關注 DAMPs將有可能為疾病的研究提供一個新方向。

綜上所述，現有技術存在的問題是：有報道Curcumin能抑制肝癌的發生，姜黃素通過抑制DAMP分子eHSP70抑制TLR4信號，從而抑制NF-κB屬于技術空白。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種利用姜黃素抑制DAMP分子 HSP70及TLR4信號抑制肝癌的新靶點及用途。

本發明是這樣實現的，一種通過抑制DAMP分子HSP70及TLR4信號抑制肝癌的姜黃素新靶點及用途，所述通過抑制DAMP分子HSP70及TLR4信號抑制肝癌的藥物為姜黃素。

本發明的另一目的在于提供一種由所述通過抑制DAMP分子HSP70及TLR4信號抑制肝癌的抗腫瘤新途徑新靶點。

本發明的另一目的在于提供一種所述通過抑制DAMP分子HSP70及TLR4 信號抑制肝癌的藥物使用的細胞培養與熱應激細胞模型，所述細胞培養與熱應激細胞模型為，細胞培養：使用RPMI-1640完全培養基培養HepG2細胞，完全培養基含90％的RPMI-1640培養基，10％胎牛血清，100單位/毫升的青/鏈霉素，置于37℃，5％CO₂的培養箱中培養；待細胞生長至融合度80％～90％時，用 0.25％胰蛋白酶消化細胞，進行1:2～1:3細胞傳代；熱應激：將HepG2細胞置于 43℃環境中加熱80min，為熱耐受HepG2細胞；用完全培養基稀釋姜黃素，姜黃素的處理濃度為20μM～100μM；

本發明的另一目的在于提供一種所述細胞培養與熱應激細胞模型的建立方法，所述細胞培養與熱應激細胞模型的建立方法包括：

細胞培養：使用RPMI-1640完全培養基培養HepG2細胞，完全培養基中含 90％的RPMI-1640培養基，10％胎牛血清，100單位/毫升的青/鏈霉素，置于37 ℃，5％CO₂的培養箱中培養；待細胞生長至融合度80％～90％時，用0.25％胰蛋白酶消化細胞，進行1:2～1:3細胞傳代；熱應激：將HepG2細胞置于43℃環境中加熱80min，為熱耐受HepG2細胞；用完全培養基稀釋姜黃素，姜黃素的處理濃度為20μM～100μM；