[發明專利]一種利用姜黃素抑制肝癌的新靶點及用途在審
| 申請號： | 201810103392.2 | 申請日： | 2018-02-01 |
| 公開（公告）號： | CN108324702A | 公開（公告）日： | 2018-07-27 |
| 發明（設計）人： | 任碧瓊;羅書笛;鄒國英 | 申請（專利權）人： | 任碧瓊 |
| 主分類號： | A61K31/12 | 分類號： | A61K31/12;A61P35/00;C12N5/09;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙) 50230 | 代理人： | 包曉靜 |
| 地址： | 410000 湖南省長*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 姜黃素 熱應激 流式細胞儀 細胞凋亡 細胞 靶點 肝癌 細胞培養 酶聯免疫吸附試驗 人肝癌細胞系 細胞周期分析 醫療技術領域 侵襲和轉移 劃痕實驗 細胞阻滯 信號抑制 統計分析 去除 增殖 分析 遷移 試驗 | ||
1.一種利用姜黃素抑制DAMP分子HSP70及TLR4信號抑制肝癌的新用途，其特征在于，所述通過抑制DAMP分子HSP70及TLR4信號抑制肝癌的發生發展，是姜黃素治療肝癌的新靶點。
2.一種由權利要求1所述姜黃素通過抑制DAMP分子HSP70及TLR4信號抑制肝癌的新靶點。
3.一種如權利要求1所述姜黃素通過抑制DAMP分子HSP70及TLR4信號抑制肝癌的發生發展，采用細胞培養技術并建立熱應激細胞模型，其特征在于，細胞培養：使用RPMI-1640完全培養基培養HepG2細胞，完全培養基成分含90％的RPMI-1640培養基，10％胎牛血清，100單位/毫升的青/鏈霉素，將細胞置于37℃，5％CO2的培養箱中培養；待細胞生長至融合度80％～90％時，0.25％胰蛋白酶消化細胞，進行1:2～1:3細胞傳代；熱應激：將HepG2細胞置于43℃環境中加熱80min，為熱耐受HepG2細胞；用完全培養基稀釋姜黃素，姜黃素的處理濃度為20μM～100μM。
4.一種如權利要求3所述的細胞培養與熱應激細胞模型建立方法，其特征在于，所述細胞培養與熱應激細胞模型的建立方法包括：
細胞培養：使用RPMI-1640完全培養基培養HepG2細胞，完全培養基含90％的RPMI-1640培養基，10％胎牛血清，100單位/毫升的青/鏈霉素，置于37℃，5％CO2的培養箱中培養；待細胞生長至融合度80％～90％時，0.25％胰蛋白酶消化細胞，進行1:2～1:3細胞傳代；熱應激：將HepG2細胞置于43℃環境中加熱80min，為熱耐受HepG2細胞；用完全培養基稀釋姜黃素，姜黃素的處理濃度為20μM～100μM；
CCK8實驗：將5×104個/ml HepG2細胞接種于96孔板中，用含10％胎牛血清，1％抗生素的RPMI 1640完全培養基，置于37℃5％CO2的培養箱中培養24h；采用濃度為20μM～100μM的姜黃素分別作用HepG2細胞24h、48h、72h后，每孔加入10μL的CCK-8溶液，置于培養箱中培養1小時，用酶標儀測定450nm處吸光度。
5.如權利要求4所述的細胞培養與熱應激細胞模型建立方法，其特征在于，根據公式計算細胞存活率(％)＝(實驗組吸光度－空白組吸光度)/(對照組吸光值－空白組吸光度)×100％。
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