[發(fā)明專利]一種鑒定香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代的EST-SSR引物和鑒定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810098698.3
• 申請(qǐng)日: 2018-01-31
• 公開（公告）號(hào): CN108220456B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬海濤;喻子牛;張躍環(huán);肖述
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

本發(fā)明公開了一種鑒定香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代的EST?SSR引物和鑒定方法。所述的EST?SSR引物Ch513為：F:5’?CTGGAATCGGTATGTCTT?3’；R:5’?GTTACGTGCACCCTAAAT?3’。利用本發(fā)明方法，可以快速、準(zhǔn)確地鑒定出香港牡蠣、熊本牡蠣、香港牡蠣×熊本牡蠣雜交子一代，具有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，同時(shí)本發(fā)明具有方法簡(jiǎn)單、結(jié)果直觀、準(zhǔn)確有效、不受環(huán)境及發(fā)育時(shí)期影響、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于水產(chǎn)生物技術(shù)中的貝類分子標(biāo)記和雜交種鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鑒定香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代的EST-SSR引物和鑒定方法。

背景技術(shù)：

牡蠣肉味鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，其養(yǎng)殖歷史已有2000多年。由于較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，牡蠣是目前中國(guó)乃至世界養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的經(jīng)濟(jì)貝類。近年來(lái)，隨著我國(guó)牡蠣養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，在種苗繁育及養(yǎng)成過(guò)程中出現(xiàn)了生長(zhǎng)緩慢、抗病抗逆性差等問(wèn)題，培育優(yōu)良新品種已成為促進(jìn)我國(guó)牡蠣養(yǎng)殖業(yè)健康持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵因素。種間雜交是水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物遺傳改良的重要手段，具有雜種優(yōu)勢(shì)的后代往往在生長(zhǎng)、生殖力、抗逆性、產(chǎn)量和品質(zhì)等方面比親本的一方或雙方優(yōu)越。

香港牡蠣(Crassostrea hongkongensis)又稱白蠔，主要分布在我國(guó)廣東、廣西兩省，喜好高溫、低鹽環(huán)境，是我國(guó)南方養(yǎng)殖的主要經(jīng)濟(jì)種，年產(chǎn)量在130萬(wàn)噸左右，具有生長(zhǎng)快、個(gè)體肥大等優(yōu)點(diǎn)。熊本牡蠣C.sikamea，主產(chǎn)于日本、中國(guó)和韓國(guó)，在我國(guó)分布于江蘇南通以南，主要包括浙江、福建、廣東、廣西、海南等地，浙江為核心分布區(qū)；喜好高溫、中高鹽環(huán)境，但個(gè)體相對(duì)較小，均為野生狀態(tài)，基本無(wú)養(yǎng)殖；由于其味道鮮美，這種牡蠣在國(guó)外市場(chǎng)上深受到廣大銷售者青睞，其價(jià)格是長(zhǎng)牡蠣和美洲牡蠣1.5～2倍。針對(duì)這兩種牡蠣在生長(zhǎng)、肉質(zhì)等方面的特點(diǎn)，本課題組進(jìn)行了香港牡蠣和熊本牡蠣的種間雜交育種試驗(yàn)并獲得成功，發(fā)現(xiàn)香港牡蠣×熊本牡蠣雜交子代的生長(zhǎng)性狀比熊本牡蠣對(duì)照組都有了明顯提高，為下一步牡蠣新品種培育奠定了良好的基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明目的在于提供一種鑒定香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代的EST-SSR引物和鑒定方法。本發(fā)明利用該方法對(duì)香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代各90個(gè)個(gè)體進(jìn)行了分析并發(fā)現(xiàn)鑒定效果顯著。

本發(fā)明從80對(duì)香港牡蠣EST-SSR引物中幸運(yùn)的篩選出1對(duì)微衛(wèi)星(SSR)引物，其對(duì)香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代各90個(gè)個(gè)體的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)擴(kuò)增圖譜可以簡(jiǎn)單高效的對(duì)真正雜交子一代進(jìn)行分子鑒定，從而簡(jiǎn)單高效地對(duì)香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代進(jìn)行大規(guī)模物種鑒定。

本發(fā)明的第一目的是提供鑒定香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代的EST-SSR引物Ch513，其特征在于，所述的EST-SSR引物Ch513為：

F:5’-CTGGAATCGGTATGTCTT-3’(其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)；

R:5’-GTTACGTGCACCCTAAAT-3’(其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示)。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種鑒定香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代的試劑盒，其特征在于，含有上述EST-SSR引物Ch513。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：