[發明專利]一種鑒定香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代的EST-SSR引物和鑒定方法

有效

• 申請號: 201810098698.3
• 申請日: 2018-01-31
• 公開（公告）號: CN108220456B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 馬海濤;喻子牛;張躍環;肖述
• 申請（專利權）人: 中國科學院南海海洋研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.鑒定香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代的EST-SSR引物Ch513，其特征在于，所述的EST-SSR引物Ch513為：

F:5’-CTGGAATCGGTATGTCTT-3’；

R:5’-GTTACGTGCACCCTAAAT-3’。

2.一種鑒定香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代的試劑盒，其特征在于，含有權利要求1所述的EST-SSR引物Ch513。

3.一種香港牡蠣、熊本牡蠣及其雜交子一代的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

提取待測牡蠣樣品的基因組DNA，然后用權利要求1所述的EST-SSR引物Ch513進行PCR擴增，將擴增產物進行電泳和染色，若在260bp～290bp區間內出現1～2條條帶，則待測牡蠣樣品為香港牡蠣，出現1條條帶說明該個體為純合子，出現2條條帶則說明該個體為雜合子；若在230bp～250bp區間內出現1～2條條帶，則待測牡蠣樣品為熊本牡蠣，出現1條條帶說明該個體為純合子，出現2條條帶則說明該個體為雜合子；當同時在260bp～290bp區間和230bp～250bp區間內各出現1條帶，則待測牡蠣樣品為香港牡蠣與熊本牡蠣雜交子一代。

4.根據權利要求3所述的鑒定方法，其特征在于，所述的用EST-SSR引物Ch513進行PCR擴增，其PCR擴增體系為：25μL，其中各種成分及終濃度分別為：DNA模板50ng，Buffer 10mM，引物各0.2mM，dNTP 0.2mM，Mg²⁺2.0mM，Taq DNA聚合酶1U，用滅菌水補足25μL。

5.根據權利要求3所述的鑒定方法，其特征在于，所述的用EST-SSR引物Ch513進行PCR擴增，其PCR反應程序為：94℃預變性5min；94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，重復30次；72℃延伸10min。