[發(fā)明專利]一種用于SFTSV檢測的熒光免疫檢測卡及其制備方法和應用

在審

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• 申請日: 2018-01-31
• 公開（公告）號: CN108254555A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發(fā)明（設計）人: 嚴劍波;何揚錦;嚴翎嘉;郭彥飛;楊志行;王虹玲
• 申請（專利權）人: 舟山市疾病預防控制中心;中國科學院上海生命科學研究院湖州營養(yǎng)與健康產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 武漢凌達知識產(chǎn)權事務所(特殊普通合伙) 42221
• 代理人: 趙宏

本發(fā)明公開了一種用于SFTSV檢測的熒光免疫檢測卡，包括由上蓋和下蓋組成的檢測卡殼以及設置在檢測卡殼內(nèi)的試紙條；試紙條包括黑色PVC基片以及首尾依次相接的吸水紙、硝酸纖維素膜和玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上包裹有熒光免疫試劑層，硝酸纖維素膜上還設置有靠近玻璃纖維膜的C線和靠近吸水紙的T線；上蓋的相應位置上分別設置有與玻璃纖維膜配合使用的點樣孔和與硝酸纖維素膜配合使用的觀察區(qū)；本發(fā)明還公開了上述熒光免疫檢測卡的制備方法和應用；利用本發(fā)明的熒光免疫檢測卡的熒光免疫層析法操作簡便、快速、靈敏度高、特異性強，適合基層醫(yī)療機構以及各級CDC對相應SFTSV流行疫區(qū)現(xiàn)場檢測。

技術領域

本發(fā)明屬于醫(yī)學檢測鑒定技術領域，具體涉及一種用于SFTSV檢測的熒光免疫檢測卡，以及其制備方法和應用。

背景技術

發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒(Severe fever with thrombocytopeniasyndrome bunyavirus， SFTSV)是自2010年被報道以來，在我國流行范圍有擴大趨勢。該病毒感染引起的發(fā)熱伴血小板減少綜合癥(Severe fever with thrombocytopeniasyndrome， SFTS)主要表現(xiàn)為發(fā)熱、血小板減少，嚴重者出現(xiàn)多器官功能衰竭進而死亡。SFTSV易感性高， 且病死率高達 10%。目前針對SFTSV的研究也處于初級階段，尚無有效的疫苗和藥物進行預防及治療。為了有效控制該疾病傳播，對其快速、準確診斷是基礎。目前常用的快速檢測方法主要是核酸檢測和基于免疫學類的檢測。基于核酸檢測法和ELISA，要求配備昂貴的儀器、試劑，甚至需要BSL-2生物安全實驗室，檢測時間長、成本高、不適用現(xiàn)場快速篩查檢測。而目前市場上的膠體金免疫層析試劑，雖然簡單、成本低，適用于現(xiàn)場快速檢測，但方法中的金顆粒示蹤物的特性決定了其檢測系統(tǒng)的缺陷，檢測靈敏度低，假陰性率偏高。SFTSV是自然疫源性疾病，通常發(fā)生于山區(qū)和丘陵等醫(yī)療衛(wèi)生條件相對較差的地區(qū)，醫(yī)療衛(wèi)生水平較低，加之病例就醫(yī)觀念較差，極大地影響了疾病的早期診斷與治療。本研究建立基于免疫層析法SFTSV總抗體快速檢測法，配合使用便攜式熒光掃描檢測儀，操作簡便、快速、靈敏度高、特異性強，適合基層衛(wèi)生門診、以及各級CDC對相應SFTSV流行疫區(qū)現(xiàn)場的快速檢測。

免疫層析檢測技術是一種建立在層析技術與抗原抗體特異性反應基礎上的免疫檢測技術。而熒光免疫層析技術，是免疫熒光技術和傳統(tǒng)免疫層析技術相結合發(fā)展創(chuàng)新的一種新型快速檢測技術。

熒光免疫層析技術采用穩(wěn)定的熒光染料標記抗體作為探針，儀器直接檢測激發(fā)熒光信號，具有較高的信噪比、更高的信號檢測量、更寬的檢測范圍和更高的檢測靈敏度，與傳統(tǒng)快速檢測技術性能比較，具有靈敏度高、檢測范圍寬和成本低等優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一在于根據(jù)現(xiàn)有技術的不足，設計一種用于SFTSV檢測的熒光免疫檢測卡。

本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種用于SFTSV檢測的熒光免疫檢測卡，包括由上蓋和下蓋組成的檢測卡殼以及設置在檢測卡殼內(nèi)的試紙條；所述的試紙條包括黑色PVC基片以及設置在黑色PVC基片上方沿其長度方向首尾依次相接的吸水紙、硝酸纖維素膜和玻璃纖維膜，所述的硝酸纖維素膜上設置有將其包裹的熒光免疫試劑層，所述的硝酸纖維素膜上還設置有靠近玻璃纖維膜的C線和靠近吸水紙的T線；所述的上蓋的相應位置上分別設置有與玻璃纖維膜配合使用的點樣孔和與硝酸纖維素膜配合使用的觀察區(qū)。

進一步，所述的熒光免疫試劑層含有檢測分析液、包被緩沖液、包被用SFTSV重組NP蛋白和包被用抗兔IgG抗體，所述的檢測分析液含有Alexa Fluor? 647熒光染料、標記用SFTSV重組NP蛋白、標記用抗兔IgG抗體和磷酸緩沖液。

進一步，所述的磷酸緩沖液的濃度為0.02 mg.mL^-1；磷酸緩沖液還含有1%的BSA和0.05％的NaEuF₄納米球。

進一步，所述的檢測分析液還含有0.02~0.06mg/ml的植物凝集素。