[發明專利]一種用于SFTSV檢測的熒光免疫檢測卡及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201810097559.9
• 申請日: 2018-01-31
• 公開（公告）號: CN108254555A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 嚴劍波;何揚錦;嚴翎嘉;郭彥飛;楊志行;王虹玲
• 申請（專利權）人: 舟山市疾病預防控制中心;中國科學院上海生命科學研究院湖州營養與健康產業創新中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 武漢凌達知識產權事務所(特殊普通合伙) 42221
• 代理人: 趙宏

1.一種用于SFTSV檢測的熒光免疫檢測卡，其特征在于：包括由上蓋（7）和下蓋（8）組成的檢測卡殼以及設置在檢測卡殼內的試紙條；所述的試紙條包括黑色PVC基片（1）以及設置在黑色PVC基片（1）上方沿其長度方向首尾依次相接的吸水紙（2）、硝酸纖維素膜（3）和玻璃纖維膜（4），所述的硝酸纖維素膜（3）上包覆有熒光免疫試劑層，所述的硝酸纖維素膜（3）上還設置有靠近玻璃纖維膜（4）的C線（5）和靠近吸水紙（2）的T線（6）；所述的上蓋（7）上分別設置有與玻璃纖維膜（4）配合使用的點樣孔（9）和與硝酸纖維素膜（3）配合使用的觀察區（10）。

2.根據權利要求1所述的一種用于SFTSV檢測的熒光免疫檢測卡，其特征在于，所述的熒光免疫試劑層含有檢測分析液、包被緩沖液、包被用SFTSV重組NP蛋白和包被用抗兔IgG抗體，所述的檢測分析液含有Alexa Fluor? 647熒光染料、標記用SFTSV重組NP蛋白、標記用抗兔IgG抗體和磷酸緩沖液。

3.根據權利要求2所述的一種用于SFTSV檢測的熒光免疫檢測卡，其特征在于，所述的磷酸緩沖液的濃度為0.02 mg.mL^-1；磷酸緩沖液中還含有1%的BSA和0.05％的NaEuF₄納米球。

4.根據權利要求3所述的一種用于SFTSV檢測的熒光免疫檢測卡，其特征在于，所述的檢測分析液還含有0.02~0.06mg/ml的植物凝集素。

5.根據權利要求4所述的一種用于SFTSV檢測的熒光免疫檢測卡，其特征在于，所述的上蓋（7）上還設有標志區（11），所述的下蓋（8）上還設置有條形碼識別區（12）。

6.一種制備如權利要求4所述的熒光免疫檢測卡的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a）檢測分析液制備：利用Alexa Fluor? 647熒光染料分別標記包被用SFTSV重組NP蛋白以及包被用抗兔IgG抗體；利用含有1%的BSA和0.05％的NaEuF₄納米球的磷酸緩沖液將熒光標記后的包被用SFTSV重組NP蛋白和包被用抗兔IgG抗體稀釋，再加入0.02~0.06mg/ml的植物凝集素充分混合配置成檢測分析液；

b）包被：用包被緩沖液分別將包被用SFTSV重組NP蛋白和包被用抗兔IgG抗體稀釋到0.4-1.0 mg.mL^-1，在20~30℃下，將稀釋后的包被用SFTSV重組NP蛋白和包被用抗兔IgG抗體均勻噴于試紙條的硝酸纖維素膜（3）上，將試紙條在12%-30%的濕度條件下烘干3小時；

c）檢測卡組裝：將步驟b）獲得的試紙條按照要求切割成適當寬度，裝入檢測卡殼的下蓋（8）中，蓋上上蓋（7），即獲得完整的檢測卡。

7.一種如權利要求1—5任一項所述的熒光免疫檢測卡的應用，其特征在于，按照以下步驟用于SFTSV檢測：

Ⅰ）將待檢測血清與檢測分析液以1:1混合均勻，將100μl混合液加入檢測卡的點樣孔（9），室溫放置10min后，通過FCR-I單通道熒光掃描檢測儀判讀結果；

Ⅱ）將通過T線（6）和C線（5）的熒光信號比值T/C結果判讀，T/C≧Cutoff值，結果為陽性，反之則為陰性。

8.根據權利要求7所述的一種熒光免疫檢測卡的應用，其特征在于，步驟Ⅱ）中所述的Cutoff值為0.16。

9.根據權利要求8所述的一種熒光免疫檢測卡的應用，其特征在于，所述的Cutoff值通過以下方式獲得，利用熒光免疫層析法檢測100例健康人血清，讀取T/C值，并計算均值（A）、標準偏差（SD）和Cutoff值；Cutoff值=T/C均值＋2SD。

10.根據權利要求7所述的一種熒光免疫檢測卡的應用，其特征在于，所述的FCR-I單通道熒光掃描檢測儀設有GPRS無線傳輸模塊。