[發明專利]食品中柑橘紅2號和蘇丹紅染料的通用檢測方法

在審

• 申請號: 201810095526.0
• 申請日: 2018-01-31
• 公開（公告）號: CN108303481A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 尹麗麗;張艷俠;劉艷明;薛霞;王駿;孫立臻;鄭紅
• 申請（專利權）人: 山東省食品藥品檢驗研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所 11308
• 代理人: 李斌

1.一種食品中柑橘紅2號和蘇丹紅染料的通用檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制備基質標準溶液并進行高效液相色譜-串聯質譜檢測

將所需測試的染料的標準儲備溶液稀釋成不同濃度梯度的標準工作溶液，在若干份已知空白基質溶液中加入標準工作溶液，得到不同濃度梯度的空白加標樣品；

(2)制作基質標準溶液-質量色譜圖和線性回歸方程

將空白加標樣品進行前處理后，得到基質標準溶液；將基質標準溶液按照濃度梯度分別進樣，用超高效液相色譜-串聯質譜聯用儀進行檢測，得到基質標準溶液-質量色譜圖；以標準質量色譜圖的基質標準色譜峰面積為縱坐標，以基質標準溶液中各染料的相應濃度值為橫坐標作圖，得標準曲線及對應的線性回歸方程；

(3)待測試樣的定性分析

將待測食品基質經過前處理后，得到待測試樣；用超高效液相色譜-串聯質譜聯用儀檢測待測試樣，得到待測試樣-質量色譜圖，通過試樣色譜峰的保留時間與標準色譜峰的保留時間相比較，且試樣色譜峰的相對豐度比與標準色譜峰相比，確定試樣中所含染料的種類；其中，所述標準色譜峰為將所述標準工作溶液用超高效液相色譜-串聯質譜聯用儀進行檢測，得到的標準品-質量色譜圖中得到；

(4)待測試樣的定量計算

采用外標法定量：根據試樣色譜峰的面積，采用步驟(2)的線性回歸方程，計算得到試樣中染料的含量；

其中，染料包括柑橘紅2號、蘇丹紅Ⅰ型、蘇丹紅Ⅱ型、蘇丹紅Ⅲ型和蘇丹紅Ⅳ型；步驟(2)和(3)中的前處理為將樣品先經過乙腈-氯化鈉體系提取，取出乙腈層氮氣吹干，用乙腈-二氯甲烷溶液溶解，再經過氨基固相萃取柱凈化，用甲酸-乙腈溶液復溶，過膜后，供超高效液相色譜-串聯質譜聯用儀進行檢測，所述樣品包括空白加標樣品和待測食品基質；所述待測食品基質包括高油脂和/或高含水量的食品基質。

2.根據權利要求1所述的通用檢測方法，其特征在于，所述前處理中，乙腈-氯化鈉體系中，乙腈-氯化鈉體系與樣品的比例為10mL:2g。

3.根據權利要求1所述的通用檢測方法，其特征在于，所述超高效液相色譜-串聯質譜聯用儀的參數如下：

液相色譜參數：

液相色譜柱：C18液相色譜柱，其柱長75mm,柱內徑2.1mm，填料粒度1.7μm；

柱溫：40℃；

進樣體積：2.0μL

流動相及梯度洗脫程序：0-3min：0.1％甲酸水溶液90％→50％，乙腈10％→50％；3.0-5.0min：0.1％甲酸水溶液50％→5％，乙腈50％→95％；5.0-7.0min：0.1％甲酸水溶液5％，乙腈95％保持2min；7.0-7.1min：0.1％甲酸水溶液5％→90％，乙腈95％→10％；7.1-9.0min：0.1％甲酸水溶液90％，乙腈10％；

質譜參數：

毛細管電壓：3.0KV；錐孔電壓：25V；脫溶劑氣溫度：500℃；離子源溫度：150℃；脫溶劑氣流速：850L/Hr；錐孔氣流速：150L/Hr；碰撞氣流速：0.12mL/min；掃描方式：多反應監測MRM。

4.根據權利要求1所述的通用檢測方法，其特征在于，所述前處理，包括以下步驟：

稱取2g樣品于50mL離心管中加入10mL乙腈，超聲20min，加入2g氯化鈉，劇烈振搖1min，超聲10min，以8000r/min轉速離心3min，取出乙腈層至15mL離心管中，40℃氮氣流下吹干，用3mL乙腈-二氯甲烷溶液溶解，待凈化；

用6mL乙腈-二氯甲烷活化氨基固相萃取柱，待液面降至柱床時，將待凈化液轉移進氨基固相萃取柱，同時收集凈化液；用3mL乙腈-二氯甲烷潤洗15mL離心管兩次，繼續收集凈化液；40℃氮氣流下濃縮至干，準確吸取10mL甲酸-乙腈溶液復溶，過微孔濾膜后，供液相色譜-串聯質譜法測定。

5.根據權利要求1-4任一項所述的通用檢測方法，其特征在于，所述待測食品基質包括水果、果醬、蜜餞、果汁飲料、辣椒油、辣椒醬、火鍋底料或肉制品。

6.根據權利要求1-4任一項所述的通用檢測方法，其特征在于，空白加標樣品為各染料含量均為5μg/kg、10μg/kg、50μg/kg、100μg/kg、200μg/kg的空白加標樣品。