[發明專利]一種構效改造的油茶活性糖蛋白及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810095020.X
• 申請日: 2018-01-31
• 公開（公告）號: CN108440639B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 李婷婷;徐云巧;吳彩娥;范龔建
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C07K1/12
• 分類號: C07K1/12;C07K1/16;C07K1/18;C12P21/00;A61K38/16;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 唐循文

一種構效改造的油茶活性糖蛋白及其制備方法和應用，包括油茶粉脫脂除皂素后，經熱水提取無水乙醇沉淀，沉淀物凍干后，再依次經過DEAE Sepharose F.F.離子交換柱、Sephadex G?100凝膠過濾柱、AKTA蛋白質分離純化儀Superdex^TM G?75凝膠柱進行分離純化，得到分子量為25 kDa的油茶活性糖蛋白；然后采用化學法和/或酶法對該糖蛋白進行構效改造。本發明的方法能夠高效的實現糖蛋白的制備及其構效改造，改造后油茶糖蛋白的活性功能發生顯著變化，有的被賦予了更高的活性，這為糖蛋白構效關系的解析提供了有效的技術途徑。

技術領域

本發明涉及食品生物技術領域，具體涉及一種構效改造的油茶活性糖蛋白及其制備方法和應用。

背景技術

油茶(Camellia oleifera Abel.)為山茶科(Theaceae)山茶屬植物，以產出油茶籽油而著稱，是我國特有的優良木本油料植物，同時它也是兼具油料、飼料、醫藥、化工、觀賞等功效為一體的多用途植物。傳統醫學所記載的油茶具有清熱解毒，活血散瘀，止痛等功效，現代研究報道表明油茶含有皂素、多糖、黃酮等豐富的活性成分，具有調節免疫力、調節血脂和血糖、抗氧化、抑菌、抗腫瘤等多種活性功能和藥用價值，但目前油茶的開發利用主要途徑是作為油料作物提取油脂，其他功能尚未被重視，這種優質的多用途資源的開發利用途徑尚顯單一。

糖蛋白廣泛存在于生物體內，是由肽鏈和糖鏈通過共價鍵結合而形成的大分子。近年來的研究發現，存在于植物中的糖蛋白具有極大的利用價值，除了具有凝聚素、結構蛋白、酶、貯藏蛋白和毒素等方面的作用，眾多文獻還報道許多植物來源的糖蛋白具有增強免疫、消炎、抗腫瘤、抗疲勞、抗氧化、降血糖、抗輻射等活性功效，目前在臨床上早已應用的重組蛋白藥物幾乎全是糖蛋白，如必思添、烏司他丁以及萬古霉素等。從細胞信號傳導、蛋白質折疊、受體結合、激素調節、免疫識別到生物半衰期的調控等方面也均能發現糖蛋白的蹤跡。尤其是在抗腫瘤方面，由于植物糖蛋白的定向歸巢、糖蛋白毒素及激素作用機制，可使藥物靶向性的集中到病灶，正常組織的生長和免疫系統的功能卻不受干擾，從而減少不良反應。

糖蛋白所具有的重要生理功能和應用價值，引發眾多學者的積極探索，但糖蛋白研究起步較晚，糖蛋白結構復雜，兼有糖類和蛋白類的結構特點，結構已經研究透徹的糖蛋白數量屈指可數。目前根據糖鏈的連接位點，有N-連接糖蛋白、O-連接糖蛋白、糖基磷脂酰肌醇錨定蛋白(GPI)和C-連接糖蛋白。由于不同糖蛋白肽鏈和糖鏈各自的特異性和多樣性，以及不同糖蛋白肽鏈和糖鏈鏈接的復雜性，其結構信息豐富多變，目前對糖蛋白的構效改造一直是個難題，尤其在糖蛋白的結構特征、功能活性、作用機理以及構效關系等未知領域有眾多問題亟待解決。

發明人前期研究發現油茶中也含有活性糖蛋白，通過系列細胞試驗以及動物體內實驗均表明該油茶糖蛋白具有良好的抗腫瘤和抗氧化活性，然而對于油茶糖蛋白的結構和功能活性的構效關系尚未闡明，尤其是糖蛋白中糖基化位點與其活性功能的關系，糖鏈在糖蛋白活性功能中的權重，在細胞或分子水平上的機理研究依舊空白，油茶糖蛋白的精細量化利用還缺乏有效、廣泛的數據支持。

發明內容

解決的技術問題：本發明針對現有技術的空白，提供一種構效改造的油茶活性糖蛋白及其制備方法和應用，本發明提出糖蛋白構效關系研究的新途徑，即通過結構改造將糖蛋白上的糖鏈進行部分或全部切除，促使其原始活性發生升高或降低的變化，從而為糖蛋白的構效解析提供依據。本發明提供了油茶糖蛋白中糖鏈結構改造的方法和過程，并對結構改造的變化進行驗證，同時考察油茶糖蛋白結構改造前后抗氧化活性和抗腫瘤活性的變化，探索出工藝條件更合理、效率更高的油茶糖蛋白構效改造方法。