[發明專利]一種構效改造的油茶活性糖蛋白及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810095020.X
• 申請日: 2018-01-31
• 公開（公告）號: CN108440639B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 李婷婷;徐云巧;吳彩娥;范龔建
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C07K1/12
• 分類號: C07K1/12;C07K1/16;C07K1/18;C12P21/00;A61K38/16;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 唐循文

1.一種構效改造的油茶活性糖蛋白的制備方法，其特征在于制備步驟為：（1）油茶活性糖蛋白的制備：油茶粉碎后經石油醚脫脂，再用體積分數為90%的乙醇除去皂素，干燥后備用；將干燥后產物，按液料比為20 mL/g在60-95℃條件下加水提取1-3h后過濾，濾液加入無水乙醇使乙醇終體積濃度為70%-90%，離心后將沉淀進行冷凍干燥，得干燥物；干燥物溶于0.01-0.05mol/L Tris-HCl緩沖液，所述Tris-HCl緩沖液pH為8且含0.02mol/L NaCl，用DEAE Sepharose F.F.離子交換柱進行分離純化，收集經0.2-0.5 mol/L NaCl洗脫液的部分，洗脫液透析除鹽后，再用Sephadex G-100凝膠過濾柱分離純化，收集第一個峰，再經AKTA蛋白質分離純化儀Superdex^TM G-75凝膠柱進行分離純化，收集第一個峰，冷凍干燥后，即得分子量為25 kDa的油茶活性糖蛋白；（2）油茶活性糖蛋白的構效改造：采用酶法改造，所述酶法是添加PNGase F酶或O-糖苷酶中的任意一種進行結構改造；稱取20-100μg的油茶糖蛋白樣品，加入1-5μL糖蛋白變性緩沖液以及9-25μL蒸餾水，使其在溫度為100℃加熱反應10min，所述糖蛋白變性緩沖液為0.5wt.% SDS含40 mM DTT，冷凍離心后加入2-10μL50mM pH6的醋酸鈉、2-10μL 10%乙基苯基聚乙二醇（NP-40）、5-25μL蒸餾水以及1-10μL酶，在37℃下培養0.5-2h，經Sephadex G-75凝膠過濾柱去除酶，即得到結構改造的油茶糖蛋白。

2.權利要求1所述制備方法制得的構效改造的油茶活性糖蛋白。

3.權利要求2所述構效改造的油茶活性糖蛋白在制備抗腫瘤藥物中的應用。