[發明專利]一種ADSCs用于改善子代大鼠高血壓的評價方法及應用

在審

• 申請號: 201810094186.X
• 申請日: 2018-01-31
• 公開（公告）號: CN108853519A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 孫同文;丁顯飛;梁火燕;李礪鋒;焦婷婷;趙瑞巧
• 申請（專利權）人: 鄭州大學第一附屬醫院
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A61K35/28;A61P9/12
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 劉松

1.一種ADSCs用于改善子代大鼠高血壓的評價方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)細胞培養：將ADSCs培養于完全培養基中；

(2)細胞標記：將1mg/ml SPIO用完全培養基配稀釋為50μg/mL；同時將多聚賴氨酸稀釋為1.5ug/ml，然后將上述兩種溶液以1:1混合致SPIO的最終濃度為25μg/mL，多聚賴氨酸稀釋最終濃度為0.75μg/mL，進行充分混勻后將其放置于細胞培養箱中30-60分鐘培養；

(3)孕期造模：構建LPS組、LPS+ADSCs組和對照組；其中，

LPS組：SD孕鼠在孕第8、10和12天腹腔注射0.79mg/kg LPS；

LPS+ADSCs組：SD孕鼠在孕第8、10和12天腹腔注射0.79mg/kg LPS，同時在孕第8天給予尾靜脈注射步驟(2)制得的ADSCs3×10⁶；

對照組：SD孕鼠在孕第8、10和12天腹腔注射等體積生理鹽水；

(4)MRI下觀察SPIO-ADSCs的遷移；

(5)觀察子代大鼠的血壓變化。

2.根據權利要求1所述的評價方法，其特征在于：所述完全培養基由基礎培養基、10％血清、雙抗和谷氨酰胺組成。

3.根據權利要求2所述的評價方法，其特征在于：所述步驟(2)中還包括普魯士藍染色，具體為，取與SPIO共孵的ADSCs，吸去培養液，PBS沖洗兩遍；4％多聚甲醛固定10min，蒸餾水沖洗2遍；6％稀鹽酸+2％的亞鐵氰化鉀等體積混合配成染色劑，添加至培養瓶中，靜置30min，然后5U/mL肝素鈉PBS及蒸餾水各洗滌兩遍；0.5％核固紅染色，共同作用1-2min，蒸餾水沖洗兩遍；顯微鏡下觀察，計算標記率并照片。

4.根據權利要求3所述的評價方法，其特征在于：所述LPS溶液要求現配現用，按每1mg脂多糖中加入0.9～1.1ml生理鹽水的比例進行配制，并充分混合搖勻；所述LPS溶液的混合搖勻時間控制在20分鐘左右。

5.根據權利要求4所述的評價方法，其特征在于：所述脂多糖與生理鹽水的配制比例為每1mg脂多糖中加入1ml生理鹽水。

6.根據權利要求5所述的評價方法，其特征在于：所述SD孕鼠是指7～8周齡的體重為250～270g的SD成年大鼠。

7.根據權利要求6所述的評價方法，其特征在于：所述步驟(3)中，選取孕鼠的腹部臍與髂前上棘連接線外1/3點為注射部位。

8.權利要求1-7任一所述的評價方法在制備用于治療子代高血壓疾病的藥物中的應用。

9.ADSCs在制備用于治療子代高血壓疾病的藥物中的應用。

10.ADSCs在制備用于治療孕期脂多糖所致子代高血壓疾病的藥物中的應用。