[發明專利]一種鑒別條斑紫菜中是否夾雜壇紫菜的方法

在審

• 申請號: 201810093750.6
• 申請日: 2018-01-31
• 公開（公告）號: CN108342501A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: 任利華;孫國華;徐英江;田秀慧;張秀珍;王鳳青
• 申請（專利權）人: 山東省海洋資源與環境研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851
• 代理公司: 煙臺智宇知識產權事務所(特殊普通合伙) 37230
• 代理人: 李增發

1.一種鑒別條斑紫菜中是否夾雜壇紫菜的方法，其特征在于，將待檢測樣品與條斑紫菜中混入1%壇紫菜的標準品均利用CTAB法提取DNA，利用提取DNA進行熒光定量PCR反應檢測壇紫菜成分的有無和相對百分含量；包括特異引物的開發和熒光定量PCR體系的建立，所述特異引物為PorF: 5’-TTC CAG GAA GGT TTT AGA ACC T-3’， PorR: 5’-GAC AAA ACAGCC TAG TTT TTG C-3’；引物來自于壇紫菜線粒體序列，可以特異擴增壇紫菜序列，但不能擴增條斑紫菜序列。

2.根據權利要求1所述的一種鑒別條斑紫菜中是否夾雜壇紫菜的方法，其特征在于，所述特異引物的序列是將壇紫菜和條斑紫菜線粒體序列從NCBI 下載，經過比對分析，找出序列差異位點，在壇紫菜線粒體序列（JQ736808.1）10104-10224位置之間121bp片段設計引物。

3.根據權利要求1所述的一種鑒別條斑紫菜中是否夾雜壇紫菜的方法，其特征在于，熒光定量PCR所用引物為所述特異引物PorF和PorR，內參序列為UBCF-TCA CAA CGA GGA TTTACC ACC；UBCR-GAG GAG CAC CTT GGA AAC G；實驗所用熒光定量SYBR GreenⅠ PCR體系：SYBR FAST Qpcr Kit Master Mix (2×) Universal5.2μl，Primer F (10μM)0.4μl，Primer R (10μM) 0.4μl，DNA 1μl，H₂O 補齊至10μl；實驗所用PCR擴增程序：95℃ 3min，95℃ 3s，60℃ 20s，40個循環；溶解曲線程序：95℃ 15s，60℃15s，95℃15s。

4.根據權利要求1所述的一種鑒別條斑紫菜中是否夾雜壇紫菜的方法，其特征在于，數據分析采用相對定量常用－ΔΔCT法，以1%標準品為參照；未知檢測樣品中壇紫菜含量百分數＝2^－ΔΔCT *1%；ΔΔCT＝（CT靶基因_Por－CT內參_UBC）檢測樣品－（CT靶基因_Por－CT內參_UBC）1%標準樣品。