[發(fā)明專利]大腸桿菌中具有產(chǎn)氫功能基因的載體pET32a-fdhF-1及其構(gòu)建和應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810093583.5 | 申請日： | 2018-01-31 |
| 公開（公告）號： | CN108220319A | 公開（公告）日： | 2018-06-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王海燕;劉偉;趙雅琪;徐嵐婷;王冕超 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/66;C12N15/53;C12P3/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京思海天達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11203 | 代理人： | 劉萍 |
| 地址： | 100124 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 大腸桿菌 產(chǎn)氫 構(gòu)建 甲酸脫氫酶 功能基因 基因工程技術(shù) 產(chǎn)氫培養(yǎng)基 產(chǎn)氫效率 基因測序 基因片段 基因載體 設(shè)計引物 驗證基因 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 擴增 酶切 應(yīng)用 轉(zhuǎn)入 基因 | ||
1.產(chǎn)氫功能基因載體pET32a-fdhF-1，其特征在于，所述基因載體為包含有大腸桿菌甲酸脫氫酶基因fdhF的pET32a質(zhì)粒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)氫功能基因載體pET32a-fdhF-1，其特征在于所述大腸桿菌Escherichia coli BL21的DE3菌株。
3.構(gòu)建如權(quán)利要求1或2所述的產(chǎn)氫功能基因載體pET32a-fdhF-1的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)設(shè)計大腸桿菌甲酸脫氫酶基因fdhF的引物，并PCR擴增大腸桿菌甲酸脫氫酶基因fdhF；
(2)回收甲酸脫氫酶基因fdhF的基因片段，進行測序驗證擴增基因的完整性；
(3)使用限制性內(nèi)切酶NdeⅠ和XhoⅠ雙酶切pET32a載體，切膠回收，獲得線性化載體；從連接了fdhF基因片段的克隆載體上，酶切并回收fdhF片段；
(4)通過T4DNA連接酶將準備好的線性化pET32a載體和fdhF片段連接起來，得到含基因fdhF的重組載體；
(5)將重組載體轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細菌，獲得正確構(gòu)建的pET32a-fdhF-1載體。
4.大腸桿菌中具有產(chǎn)氫功能基因的載體pET32a-fdhF-1的應(yīng)用，其特征在于，將權(quán)利要求1或2所述產(chǎn)氫功能基因載體pET32a-fdhF-1轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，在產(chǎn)氫培養(yǎng)基中培養(yǎng)此大腸桿菌產(chǎn)氫。
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