[發明專利]一種核酸快速提取方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201810093348.8
• 申請日: 2018-01-30
• 公開（公告）號: CN108342382B
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 侯月娥;伍建敏;李中圣
• 申請（專利權）人: 廣東海大畜牧獸醫研究院有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 羅晶;高淑怡

本發明公開了一種核酸快速提取方法，包括以下步驟：1)將樣品置入含有提取溶液的收集管，分散裂解均勻；所述提取溶液中含有Tris緩沖液；2)將吸附膜浸漬于提取溶液；所述吸附膜是經含有季銨鹽的陰離子樹脂處理后的纖維素膜；3)使用洗滌緩沖液浸洗吸附膜，將吸附膜置于洗脫液或PCR反應液中釋放核酸。本發明同時提供與上述方法對應的試驗盒。本發明以固相提取的原理，在弱堿性條件下，使帶負電的核酸吸附于經含有季銨鹽的陰離子樹脂處理后的纖維素膜，再通過洗脫液進行洗脫，以快速地獲得核酸；該方法提取過程快速、雜質少、對溫度的限制性小、核酸不易解離，適用于戶外等條件簡陋的場合。

技術領域

本發明涉及基因工程技術方法及其儀器技術領域，尤其涉及一種核酸快速提取方法及其試劑盒。

背景技術

核酸包括DNA、RNA兩種分子，在細胞中都是以與蛋白質結合的狀態存在。

提供分離純化核酸總的原則：1)應保證核酸一級結構的完整性；2)排除其它分子的污染。

在分離過程中，應該注意以下事項：

1.)盡量簡化操作步驟，縮短提取過程，以減少各種有害因素對核酸的破壞；

2)減少化學因素對核酸的降解，為避免過酸、過堿對核酸鏈中磷酸二酯鍵的破壞，操作多在pH4-10的條件下進行；

3)減少物理因素對核酸的降解，而易造成降解的因素主要包括機械剪切力和高溫；核酸提取過程中，一般在低溫操作，但現在發現在室溫快速提取與低溫提取，獲得核酸的質量沒有太大差異；

4)防止核酸的生物降解，細胞內或外來的各種核酸酶消化核酸鏈中的磷酸二酯鍵，直接破壞核酸的一級結構，如DNA酶和RNA酶；其中DNA酶是需要金屬二價離子Mg²⁺、Ca²⁺的激活，使用EDTA、檸檬酸鹽螯合金屬二價離子基本可以抑制DNA酶活性。而RNA酶不但分布廣泛，極易污染樣品，而且耐高溫、耐酸、耐堿、不易失活，所以是生物降解RNA提取過程的主要危害因素。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的之一在于提供一種易于在戶外操作的核酸快速提取方法。

本發明的目的之二在于提供一種快速核酸提取試劑盒。

本發明的目的之一采用如下技術方案實現：

一種核酸快速提取方法，包括以下步驟：

1)將樣品置入含有提取溶液的收集管，分散裂解均勻；所述提取溶液中含有Tris緩沖液；

2)將吸附膜浸漬于提取溶液；所述吸附膜是經含有季銨鹽的陰離子樹脂處理后的纖維素膜；

3)使用洗滌緩沖液浸洗吸附膜，將吸附膜置于洗脫液或PCR反應液中釋放核酸。

進一步地，步驟1)中，所述Tris緩沖液的pH值為8.0。

進一步地，步驟1)中，所述提取溶液中，還含有最終濃度為以下濃度的以下組分：1M的異硫氰酸胍、0.5wt％TritonX100，1wt％Tween-20，60μg/mL的蛋白酶K。

進一步地，步驟1)中，加入研磨球進行分散；所述提取溶液中，還含有最終濃度為以下濃度的以下組分：2M的異硫氰酸胍、150mM NaCl、10m M EDTA，1％Tween-20，0.5％SDS。

進一步地，所述研磨球為鋼球。

進一步地，步驟3)中，在pH＝8.3的條件下釋放核酸。

本發明的目的之二采用如下技術方案實現：