[發明專利]復制型重組腺病毒HAdV-5載體系統及其應用有效
| 申請號： | 201810092715.2 | 申請日： | 2018-01-30 |
| 公開（公告）號： | CN108048483B | 公開（公告）日： | 2021-02-02 |
| 發明（設計）人： | 魯茁壯;劉紅軍;鄒小輝 | 申請（專利權）人： | 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所;北京知光基因科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/861 | 分類號： | C12N15/861 |
| 代理公司： | 中科專利商標代理有限責任公司 11021 | 代理人： | 崔亞松 |
| 地址： | 100052 北京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 復制 重組 病毒 hadv 載體 系統 及其 應用 | ||
1.一種復制型重組腺病毒HAdV-5載體系統，其包括骨架質粒、中間質粒和穿梭質粒，其中所述骨架質粒命名為pKAd5，所述中間質粒命名為pMDXE3YA，并且所述穿梭質粒命名為pKNXE3M，其特征在于：
所述骨架質粒pKAd5含有HAdV-5完整基因組；同時還含有在原核細胞中進行質粒復制所需的pBR322的復制起點、卡那霉素抗性基因；
所述中間質粒pMDXE3YA包含HAdV-5基因組NdeI位點之間的片段，該片段含有的腺病毒E3區由黃色熒光蛋白YFP編碼區和SV40 polyA信號替換；以及在原核細胞中進行質粒復制所需的pBR322的復制起點、氨芐青霉素的抗性基因；
所述穿梭質粒pKNXE3M包含中間質粒pMDXE3YA EcoRI位點之間的片段，該片段含有的黃色熒光蛋白編碼區由多克隆位點替代；以及在原核細胞中進行質粒復制所需的pBR322的復制起點、卡那霉素抗性基因。
2.根據權利要求1所述的復制型重組腺病毒HAdV-5載體系統，其特征在于：在所述骨架質粒pKAd5中，在HAdV-5基因組末端各添加有一個限制性內切酶PacI酶切位點。
3.根據權利要求1或2所述的復制型重組腺病毒HAdV-5載體系統，其特征在于：在中間質粒pMDXE3YA中，在HAdV-5基因組片段的末端各有一個限制性內切酶NdeI酶切位點。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的復制型重組腺病毒HAdV-5載體系統，其特征在于：在穿梭質粒pKNXE3M中，自pMDXE3YA分離的片段的末端各有一個限制性內切酶EcoRI酶切位點；所述多克隆位點含有的限制性內切酶位點包括KpnI、HindIII、EcoRV、BamHI、XhoI和BglII酶切位點。
5.權利要求1-4中任一項所述的復制型重組腺病毒HAdV-5載體系統在制備基因治療試劑盒或重組疫苗中的應用。
6.一種基因治療試劑盒，其包含權利要求1-4中任一項所述的復制型重組腺病毒HAdV-5載體系統。
7.一種重組疫苗，其包含有效量的攜帶外源目的基因的復制型重組腺病毒HAdV-5，其中所述攜帶外源目的基因的復制型重組腺病毒HAdV-5利用權利要求1-4中任一項所述的復制型重組腺病毒HAdV-5載體系統制備得到。
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