[發明專利]苦西瓜中葫蘆素E及糖苷的制備方法

在審

• 申請號: 201810091353.5
• 申請日: 2018-01-30
• 公開（公告）號: CN108299535A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 黃三文;周淵;尚軼
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院深圳農業基因組研究所
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00;C07J17/00;C07H15/256;C07H1/08
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

本發明提供一種苦西瓜中葫蘆素E及糖苷的制備方法，用乙醇提取苦西瓜，然后除去乙醇，收集醇提物，再經過大孔樹脂柱層析分離，半制備HPLC純化，分別得到式(I)和式(II)所示的葫蘆素E及單葡萄糖苷。本發明首次公開了從苦西瓜中提取純化獲得葫蘆素E及其糖苷的方法，所得終產物的產率和純度高，流程簡單，易于工業化放大生產。

技術領域

本發明屬于天然藥物化學領域，具體地說，涉及一種從苦西瓜中制備葫蘆素E及糖苷的方法。

背景技術

苦西瓜是指葫蘆科西瓜屬帶有苦味的西瓜品種，如藥西瓜(拉丁名Citrulluscolocynthis)、未經馴化的西瓜(拉丁名Citrullus lanatus(Thunb.)Matsum.et Nakai，英文名Water Melon)野生品種及人工培育的帶苦味的西瓜等。其中，藥西瓜又稱“苦西瓜”、“苦蘋果”或“苦黃瓜”，原產于地中海地區，在我國主要分布在新疆等地，是維吾爾族習用藥材，收載于我國一九九八年衛生部頒藥材標準(維吾爾分冊)中。主要適用于由寒氣所引起的各種疾病，緩解疼痛，通氣，消腫止痛。主治便秘，癱瘓，開竅，牙疼，胸悶，風濕等。

苦西瓜果實和根中含有多種葫蘆素成分，其中以葫蘆素E及其單葡萄糖苷含量最高。現代藥理研究表明，葫蘆素類化合物具有很強的抗癌活性。據報道，葫蘆素B、E、I，對乳腺癌、肺癌、肝癌等癌細胞的增殖具有很強的抑制作用。甜瓜中的葫蘆素B、E已被開發成五類中藥“葫蘆素片”，主要應用于濕熱毒盛所致遷延性肝炎、慢性肝炎及原發性肝癌的輔助治療。

葫蘆素E(Cucurbitacin E)，異名α-西洋苦瓜素。分子式C₃₂H₄₄O₈，分子量：556.695，CAS號：18444-66-1。葫蘆素E最早分別于1909年和1910在噴瓜和藥西瓜中被發現，此后，在甜瓜、西瓜、雪膽、栝樓、天花粉等葫蘆科植物中發現有葫蘆素E的存在，其中，以甜瓜蒂中的含量最高，但仍不足0.4％(干重)。目前市售的葫蘆素E均從甜瓜蒂中提取純化而來，但甜瓜蒂中主要為葫蘆素B，而葫蘆素E含量相對極低，且二者極性大小接近，這給葫蘆素E的提純帶來很大的干擾，使得工藝流程復雜，成本難以得到有效的降低，售價高達四萬元每克。

前期研究發現，藥西瓜和西瓜野生品種中葫蘆素E及其單葡萄糖苷的含量很高，其中，藥西瓜中葫蘆素E及其單葡萄糖苷合計達到6％(濕重)(圖1)，但目前尚未有苦西瓜中葫蘆素E及其糖苷制備工藝的文獻報道，本發明采用葫蘆素E及其糖苷含量極高的苦西瓜為提取原材料，可極大地降低葫蘆素E及其糖苷的生產成本。

發明內容

本發明的目的是提供一種從苦西瓜中提取葫蘆素E及其糖苷的方法。

為了實現本發明目的，本發明提供的苦西瓜中葫蘆素E及糖苷的制備方法，用乙醇提取苦西瓜，然后除去乙醇，收集醇提物，再經過大孔樹脂柱層析分離，半制備HPLC純化，分別得到式(I)和式(II)所示的葫蘆素E及單葡萄糖苷。

本發明中醇提對象為苦西瓜鮮藥材，或干藥材粗粉。具體地，鮮藥材用勻漿機打碎后，用乙醇提取；或者，將成熟的苦西瓜曬干、粉碎，過24目篩，得到干藥材粗粉，然后用乙醇提取。

前述的方法，包括以下步驟：

1)用乙醇提取苦西瓜，然后除去乙醇，收集醇提物；

2)將所述醇提物溶解于乙醇中，使乙醇含量達20％，離心或抽濾收集上清液或濾液；

3)所述上清液或濾液進行大孔樹脂柱層析分離，依次用水、30％乙醇、濃度不低于35％的乙醇、濃度不低于60％的乙醇梯度洗脫，分別收集濃度不低于35％和不低于60％的乙醇洗脫組分；

4)將收集得到的濃度不低于35％的乙醇洗脫組分用半制備HPLC進行分離純化，得到式(II)所示化合物；