[發明專利]苦西瓜中葫蘆素E及糖苷的制備方法

在審

• 申請號: 201810091353.5
• 申請日: 2018-01-30
• 公開（公告）號: CN108299535A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 黃三文;周淵;尚軼
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院深圳農業基因組研究所
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00;C07J17/00;C07H15/256;C07H1/08
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.苦西瓜中葫蘆素E及糖苷的制備方法，其特征在于，用乙醇提取苦西瓜，然后除去乙醇，收集醇提物，再經過大孔樹脂柱層析分離，半制備HPLC純化，分別得到式(I)和式(II)所示的葫蘆素E及單葡萄糖苷；

其中，所述苦西瓜是指鮮藥材，或干藥材粗粉。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)用乙醇提取苦西瓜，然后除去乙醇，收集醇提物；

2)將所述醇提物溶解于乙醇中，使乙醇含量達20％，離心或抽濾收集上清液或濾液；

3)所述上清液或濾液進行大孔樹脂柱層析分離，依次用水、30％乙醇、濃度不低于35％的乙醇、濃度不低于60％的乙醇梯度洗脫，分別收集濃度不低于35％和不低于60％的乙醇洗脫組分；

4)將收集得到的濃度不低于35％的乙醇洗脫組分用半制備HPLC進行分離純化，得到式(II)所示化合物；

5)將收集得到的濃度不低于60％乙醇水洗脫組分用半制備HPLC進行分離純化，得到式(I)化合物。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟1)中所述乙醇的濃度為40％～95％，提取方法選自滲漉提取、加熱回流提取或浸漬提取中的任一種。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟3)中所用大孔樹脂的型號選自D101、AB-8、HP-20、H-103、DA-201、DM-130、XAD-16或DS-401。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述濃度不低于35％的乙醇，其濃度范圍為35％～60％；所述濃度不低于60％的乙醇，其濃度范圍為60％～95％。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟4)進行HPLC分離純化時，所用反相色譜柱的填料為C8或C18。

7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟4)進行HPLC分離純化時，所用流動相為甲醇-水或乙腈-水，體積比10:90～70:30。

8.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟5)進行HPLC分離純化時，所用流動相為甲醇-水或乙腈-水，體積比30:70～80:20。

9.根據權利要求1-8任一項所述的方法，其特征在于，所述方法具體為：取1kg苦西瓜干藥材粗粉，加入1倍重量的75％乙醇潤濕浸泡6小時，然后將潤濕好的苦西瓜樣品加入到滲漉筒中，用75％乙醇滲漉提取，收集8倍量的滲濾液，減壓真空濃縮至無醇味；濃縮液中加入130mL 95％乙醇，使得濃縮液乙醇含量達到20％，離心過濾，得上清液；將上清液加樣至D101大孔樹脂進行分離，依次用水、30％乙醇、50％乙醇、80％乙醇梯度洗脫，分別收集50％和80％乙醇洗脫液，減壓濃縮得浸膏；

50％乙醇洗脫所得浸膏用Agilent 1260半制備HPLC進行分離純化，DAD檢測器，采集波長為230nm，制備柱規格為反相C18色譜柱20mm×250mm，流動相為甲醇：水體積比45:55的混合液，流速為8ml/min，收集保留時間為16.5min的流出峰，得到式(II)所示化合物；

80％乙醇洗脫所得浸膏用Agilent 1260半制備HPLC進行分離純化，DAD檢測器，采集波長為230nm，制備柱規格為反相C18色譜柱20mm×250mm，流動相為甲醇：水體積比65:35的混合液，流速為8ml/min，收集保留時間為19min的流出峰，得到式(I)所示化合物。

10.根據權利要求1-8任一項所述的方法，其特征在于，所述方法具體為：

取1kg苦西瓜鮮藥材，用勻漿機打碎，用75％乙醇回流提取3次，每次1h，提取溶劑量分別為6倍量、5倍量和5倍量；合并提取液，減壓真空濃縮至無醇味；向濃縮液中加入200mL95％乙醇，使得濃縮液乙醇含量達到20％，離心過濾，得上清液；將上清液加樣至D101大孔樹脂進行分離，依次用水、30％乙醇、50％乙醇、80％乙醇梯度洗脫，分別收集50％和80％乙醇洗脫液，減壓濃縮回收溶劑得浸膏；

50％乙醇洗脫所得浸膏用Agilent 1260半制備HPLC進行分離純化，DAD檢測器，采集波長為230nm，制備柱規格為反相C18色譜柱20mm×250mm，流動相為甲醇：水體積比45:55混合液，流速為8ml/min，收集保留時間為16.5min的流出峰，得到式(II)所示化合物；

80％乙醇洗脫所得浸膏用Agilent 1260半制備HPLC進行分離純化，DAD檢測器，采集波長為230nm，制備柱規格為反相C18色譜柱20mm×250mm，流動相為甲醇：水體積比65:35的混合液，流速為8ml/min，收集保留時間為19min的流出峰，得到式(I)所示化合物。