[發(fā)明專利]鉤吻素己半抗原和全抗原及其制備方法與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810089277.4
• 申請日: 2018-01-30
• 公開（公告）號: CN108409749B
• 公開（公告）日: 2019-09-06
• 發(fā)明（設計）人: 楊術鵬;李熠;張金振;周金慧;張靜;關利娟;金玥;袁媛;王鵬;趙文
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院蜜蜂研究所
• 主分類號: C07D491/22
• 分類號: C07D491/22;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K1/107;G01N33/531;G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.鉤吻素己半抗原，其特征在于，其結(jié)構(gòu)如式(I)所示：

2.鉤吻素己全抗原，其特征在于，由權(quán)利要求1所述鉤吻素己半抗原與載體蛋白偶聯(lián)后得到的；其中，所述載體蛋白選自BSA、VOA、KLH。

3.由權(quán)利要求2所述鉤吻素己全抗原制備的特異性抗體。

4.由權(quán)利要求1所述鉤吻素己半抗原，或權(quán)利要求2所述鉤吻素己全抗原，或權(quán)利要求3所述特異性抗體制備的鉤吻素己檢測試劑或試劑盒。

5.權(quán)利要求1所述鉤吻素己半抗原，或權(quán)利要求2所述鉤吻素己全抗原，或權(quán)利要求3所述特異性抗體，或權(quán)利要求4所述檢測試劑或試劑盒在鉤吻素己的ELISA免疫分析檢測中的應用。

6.權(quán)利要求1所述鉤吻素己半抗原，或權(quán)利要求2所述鉤吻素己全抗原，或權(quán)利要求3所述特異性抗體，或權(quán)利要求4所述檢測試劑在制備鉤吻素己的膠體金檢測試紙條中的應用。

7.權(quán)利要求1所述鉤吻素己半抗原的制備方法，其特征在于，將50mg鉤吻素己溶于3mL無水THF，加入3.0eq硼氫化鈉，每隔3h加入5μL無水甲醇，共加入15μL，加畢，室溫攪拌12h；加入20μL冰乙酸淬滅反應，將反應體系倒入分液漏斗，加入10mL水，60mL二氯甲烷，分3次萃取；合并有機相，濃縮干燥后進行柱色譜分離，得式(II)化合物；然后，將20mg式(II)化合物溶于0.4mL DMF，加入2.0eq琥珀酸酐，室溫攪拌過夜，反應體系加水淬滅后，用乙酸乙酯萃取，然后用稀鹽酸洗滌，有機相干燥濃縮后，柱色譜分離即得目標化合物；

其中，式(II)化合物的結(jié)構(gòu)如下：

8.權(quán)利要求2所述鉤吻素己全抗原的制備方法，其特征在于，采用活潑酯法合成鉤吻素己全抗原，具體如下：

用N,N二甲基甲酰胺溶解鉤吻素己半抗原，將鉤吻素己半抗原與N-羥基琥珀酰亞胺，1-已基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺按摩爾比1:2:4混合，室溫避光反應5h，得到活化的鉤吻素己半抗原溶液；將載體蛋白溶解于磷酸鹽緩沖液中，制成濃度5mg/mL的載體蛋白溶液；將活化的鉤吻素己半抗原溶液逐滴加到載體蛋白溶液中，邊滴加邊攪拌，使活化的鉤吻素己半抗原與載體蛋白的摩爾比達4:1，4℃攪拌反應過夜，用磷酸鹽緩沖液透析3天，離心取上清，即得鉤吻素己全抗原。