[發(fā)明專(zhuān)利]重組豬白介素22在大腸桿菌中的高效表達(dá)及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810086942.4
• 申請(qǐng)日: 2018-01-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108070599B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 庾慶華;栗云云;楊倩
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/24
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/24;C12N15/70;C12N1/21;C07K14/54;C07K1/113;A61K38/20;A61P31/04;A61P31/10;C12R1/19
• 代理公司: 南京蘇高專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

本發(fā)明公開(kāi)了一種編碼重組豬白介素22的基因。本發(fā)明還公開(kāi)含有所述重組基因的重組表達(dá)載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系統(tǒng)、轉(zhuǎn)基因重組菌和宿主細(xì)胞。本發(fā)明還公開(kāi)重組豬白介素22及其提取純化方法。本發(fā)明還公開(kāi)重組質(zhì)粒pET?32a（+）?pIL?22、重組菌株，重組蛋白在抗凋亡和抗大腸桿菌感染的應(yīng)用。本發(fā)明構(gòu)建的表達(dá)重組豬白介素22的載體pET?32a（+）中含有His標(biāo)簽，從大腸桿菌中提取的重組豬白介素22蛋白與His標(biāo)簽相連，可通過(guò)His的柱子得到高度純化的重組豬白介素22蛋白；重組豬白介素22蛋白表達(dá)產(chǎn)量通過(guò)Quantity One軟件統(tǒng)計(jì)，純度高達(dá)95.7%。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及表達(dá)豬的白介素22的大腸桿菌，屬于生物技術(shù)基因工程領(lǐng)域；具體包括：表達(dá)重組豬白介素22的質(zhì)粒pET-32a(+)-pIL-22的構(gòu)建，表達(dá)重組豬白介素22的提取純化，以及該重組表達(dá)的豬白介素22能夠在抗脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)誘導(dǎo)的凋亡和抗大腸桿菌感染中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

1、豬白介素22的研究進(jìn)展

豬白介素22是白介素10家族成員之一，它主要是由天然免疫和適應(yīng)性免疫中的淋巴系統(tǒng)細(xì)胞系產(chǎn)生，包括αβT細(xì)胞，γδT細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞和天然淋巴細(xì)胞(ILCs)，除了淋巴組織外，巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞也可產(chǎn)生白介素22。研究報(bào)道IL-22具有多種生理功能，它可以誘導(dǎo)先天抗菌素(防御素、Reg家族分子、S100蛋白)的表達(dá)和黏蛋白(Muc1、Muc3、Muc10和Muc13)的分泌，對(duì)腸黏膜起到功能性屏障，同時(shí)，IL-22可以與抗菌防御素、黏膜免疫抗病毒細(xì)胞因子IFN-λ聯(lián)合作用，共同提高IEC的組織屏障，以減輕黏膜病毒的感染。近年來(lái)對(duì)IL-22的研究主要集中在人源和鼠源，但豬IL-22的研究鮮有報(bào)道。有關(guān)豬白介素22能否通過(guò)活化STAT3信號(hào)而抗凋亡的研究以及是否抗大腸桿菌感染尚不清楚。

2、豬白介素22在抗脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)誘導(dǎo)凋亡及抗大腸桿菌感染作用

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)是單端孢霉烯族化合物，鐮刀菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，它存在于農(nóng)作物以及食品和飼料中，引起動(dòng)物的嘔吐、腹瀉、胃腸道出血等，嚴(yán)重威脅動(dòng)物的健康，而豬對(duì)DON是最敏感的動(dòng)物，研究表明相對(duì)較低的濃度(≥50μg/kg b.w.)會(huì)造成豬的嘔吐，同時(shí)DON可以誘導(dǎo)豬腸上皮細(xì)胞發(fā)生凋亡，從而破壞腸黏膜屏障，促進(jìn)腸道病毒、梭菌、大腸桿菌等病原微生物的入侵。而人源或者鼠源白介素22在人和小鼠上證實(shí)其可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生先天抗菌素、黏蛋白等抗菌物質(zhì)，從而修復(fù)慢性結(jié)腸炎及急性腸道的損傷。而豬白介素22是否可以抗脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)誘導(dǎo)的凋亡以及是否能抗大腸桿菌的感染尚不清楚。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一種編碼重組豬白介素22的基因。

本發(fā)明還要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一種含有所述的編碼重組豬白介素22的基因的重組表達(dá)載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系統(tǒng)或轉(zhuǎn)基因重組菌。

本發(fā)明還要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了編碼重組豬白介素22的基因、所述的重組表達(dá)載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系統(tǒng)或轉(zhuǎn)基因重組菌在生產(chǎn)重組豬白介素22中的應(yīng)用。

本發(fā)明還要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一種重組質(zhì)粒pET-32a(+)-pIL-22的構(gòu)建。

本發(fā)明還要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一種重組豬白介素22的提取純化方法。

技術(shù)方案：為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種編碼重組豬白介素22的基因，其堿基序列如SEQ ID NO：1所示。

本發(fā)明內(nèi)容還包括含有所述的編碼重組豬白介素22的基因的重組表達(dá)載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系統(tǒng)或轉(zhuǎn)基因重組菌。

其中，所述的重組表達(dá)載體，是將所述的基因插入到大腸桿菌表達(dá)載體中得到含有重組豬白介素22的基因的表達(dá)載體。

其中，上述大腸桿菌表達(dá)載體為pET-32a(+)。