[發(fā)明專利]重組豬白介素22在大腸桿菌中的高效表達(dá)及其應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810086942.4 | 申請日： | 2018-01-30 |
| 公開（公告）號： | CN108070599B | 公開（公告）日： | 2021-07-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 庾慶華;栗云云;楊倩 | 申請（專利權(quán)）人： | 南京農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/24 | 分類號： | C12N15/24;C12N15/70;C12N1/21;C07K14/54;C07K1/113;A61K38/20;A61P31/04;A61P31/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 王艷 |
| 地址： | 210095 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 重組 白介素 22 大腸桿菌 中的 高效 表達(dá) 及其 應(yīng)用 | ||
1.重組豬白介素22的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）重組豬白介素22基因的獲得；所述重組豬白介素22的基因，其堿基序列如SEQ IDNO：1所示；
2）重組質(zhì)粒pET-32a（+）-pIL-22的構(gòu)建；將所述的基因插入到大腸桿菌pET-32a（+）表達(dá)載體中得到重組質(zhì)粒pET-32a（+）-pIL-22；
3）重組大腸桿菌的表達(dá)；將所述的重組質(zhì)粒pET-32a（+）-pIL-22導(dǎo)入大腸桿菌E. coliBL21 （DE3）中表達(dá)，通過菌落PCR進(jìn)行驗證獲得陽性重組大腸桿菌；
4）重組豬白介素22的提取和純化：將驗證陽性的重組大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)得到菌體，將菌體加入PBS重懸離心，重懸液進(jìn)行超聲破碎，破碎后的得到的菌液離心，收集上清和沉淀進(jìn)行SDS-PAGE驗證，發(fā)現(xiàn)目的蛋白在包涵體中大量存在，上清中幾乎沒有，將包涵體沉淀尿素變性后，再通過梯度透析復(fù)性，收集復(fù)性后的液體過His柱子，純化得到豬白介素22。
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