[發明專利]一種透明質酸酶的制備方法

在審

• 申請號: 201810085468.3
• 申請日: 2018-01-29
• 公開（公告）號: CN108220272A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 史政豪;徐國華;袁峰;趙伏梅
• 申請（專利權）人: 江蘇神華藥業有限公司
• 主分類號: C12N9/26
• 分類號: C12N9/26;C12R1/84
• 代理公司: 北京思創大成知識產權代理有限公司 11614
• 代理人: 尹慧晶

本發明屬于發酵工程技術領域，具體公開了一種透明質酸酶的制備方法。本發明通過優化發酵條件，找出了合適的甘油、甲醇補加速率和補加時間以及總誘導時間等條件，實現了透明質酸酶的高效表達，為進一步降低水蛭透明質酸酶的生產成本和擴大應用范圍奠定了一定的基礎，適合于工業化生產。

技術領域

本發明涉及一種透明質酸酶的制備方法，屬于發酵工程技術領域。

背景技術

透明質酸是一種酸性粘多糖，1934年美國哥倫比亞大學眼科教授Meyer等首先從牛眼玻璃體中分離出該物質。由N-乙酰氨基葡糖和D-葡糖醛酸雙糖重復單位構成的無分支高分子糖胺聚糖，存在于動物組織細胞間質和某些細菌的莢膜中。透明質酸以其獨特的分子結構和理化性質在機體內顯示出多種重要的生理功能，如潤滑關節，調節血管壁的通透性，調節蛋白質，水電解質擴散及運轉，促進創傷愈合等。尤為重要的是，透明質酸具有特殊的保水作用，是目前發現的自然界中保濕性最好的物質。

近年來研究發現，低分子量的HA(低于1×10⁴)和透明質酸寡糖具有獨特的生物學功能。根據文獻研究表明，分子量大小對HA的生物活性影響較大，不同分子量范圍的HA卻表現出截然不同的生理學功能。高分子量的HA(Mr>2×10⁶)由于具有較好的粘彈性、保濕性、抑制炎性反應、潤滑等功能，可應用于高端化妝品行業、眼科手術黏彈劑和關節腔內注射治療。中等分子量的HA(介于1×10⁵-10⁶)具有良好的保濕性、潤滑和藥物緩釋作用，可廣泛用于化妝品、滴眼液、皮膚燒傷愈合及術后防粘連。低分子量的HA(低于1×10⁴)和寡聚透明質酸，表現出非常強的生物活性，具有抑制腫瘤擴散、促進創傷愈合、促進骨和血管生成、免疫調節等作用，且易于滲透到真皮中，免疫細胞、細胞因子的激活劑。因此，小分子透明質酸在食品保健、化妝品以及臨床醫療領域具有廣闊的應用前景。

寡聚透明質酸在體內具有促血管生成作用，在體外可促進內皮細胞的增生，促進創傷愈合(West DC,Kumar S.The effect of hyaluronate and its oligosaccharides onendothelial cell proliferation and monolayer integrity.Exp Cell Res.1989,183(1):179-96)。寡聚透明質酸鹽具有促血管生成、促進創傷愈合等生物活性，在醫藥領域具有良好的應用前景。

在炎癥過程中，寡聚透明質酸對樹突細胞和巨噬細胞等免疫活性細胞具有強力活化作用(Termeer C,Benedix F,Sleeman J,et al.Oligosaccharides of Hyaluronan activate dendritic cellsvia toll-like receptor4.JExp Med.2002,195(1):99-111)。

研究發現，寡聚透明質酸具有抗腫瘤作用。如寡聚透明質酸在體外可以抑制小鼠TA3/st乳腺癌細胞、大鼠C6神經膠質瘤細胞、人HCT克隆瘤細胞及人LX1肺癌細胞的生長，抑制率為50％～100％(Ghatak S,Misra S,Toole BP.Hyaluronan constitutively regulatesErbB2phosphorylation and signaling complex formation in carcinoma cells.JBiol Chem.2005,280(10):8875-83)。