[發(fā)明專利]評(píng)估水中污染物的神經(jīng)性毒性的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810084597.0
• 申請(qǐng)日: 2018-01-29
• 公開（公告）號(hào): CN108251508A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任宗明;潘宏偉;任佰祥;喬琳琳;李尚戈;楊美怡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6851
• 分類號(hào): C12Q1/6851
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 鄭平

1.一種利用斑馬魚對(duì)水中污染物的神經(jīng)性毒性的潛在風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估的方法，其特征在于，包括：

配制10％地表水濃度的溴氰菊酯溶液；

選取適量的斑馬魚分別在曝氣水和10％地表水濃度的某污染物溶液中進(jìn)行為期七天的連續(xù)暴露，分別即為空白組和實(shí)驗(yàn)組；

對(duì)上述空白組和實(shí)驗(yàn)組的斑馬魚腦部進(jìn)行解剖，提取總RNA、反轉(zhuǎn)錄成cDNA，并進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增；

用2^－△△CT法對(duì)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行相對(duì)定量分析，并繪制折線圖，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)估水中污染物可能對(duì)毒蕈堿受體(M1受體)的功能的影響。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述溴氰菊酯溶液的配制方法為：將0.02g溴氰菊酯溶于5mLDMSO中，加入995mL去離子水，配置成1L母液(0.02g/L)；取100μL母液于錐形瓶中，用去離子水定容到1L，配成1L的濃度為0.002mg/L的實(shí)驗(yàn)用溶液。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述DMSO在水中的濃度小于0.5％。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述解剖處理的具體步驟為：取斑馬魚，放入1.5mL EP管中，進(jìn)行窒息處理；在無菌操作條件下對(duì)斑馬魚的腦部進(jìn)行解剖。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述斑馬魚的試驗(yàn)條件為：溫度22±2℃；光周期:16h光照，04:00-20:00，光照強(qiáng)度4000lx；8h黑暗，20:00-04:00；每天8:30和16:30各喂食一次。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述斑馬魚的軀干長(zhǎng)3cm，尾長(zhǎng)2cm。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增采用兩步法，具體擴(kuò)增條件如表1所示。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取總RNA的試劑盒為動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒DP431。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述反轉(zhuǎn)錄成cDNA的試劑盒的型號(hào)為KR106FastQuant RT Kit。

10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的試劑為SuperRealPreMix Plus(SYBR Green)(FP205)。