[發明專利]腸上皮類器官無生長因子培養方法有效
| 申請號： | 201810083614.9 | 申請日： | 2018-01-29 |
| 公開（公告）號： | CN108085296B | 公開（公告）日： | 2021-04-13 |
| 發明（設計）人： | 陳曄光;李葉華;劉媛 | 申請（專利權）人： | 清華大學 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 趙天月 |
| 地址： | 10008*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 上皮 器官 生長因子 培養 方法 | ||
1.一種用于培養腸隱窩或腸干細胞的培養基，其特征在于，包括：基礎培養基、血清替代物、雙抗、谷氨酸鹽/酯、N-乙酰半胱氨酸，CHIR-99021以及LDN-193189，
其中，所述CHIR-99021的濃度為7～15μM，所述LDN-193189的濃度為100～200nM，
且所述培養基中不含有EGF。
2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述培養基進一步包括blebbistatin。
3.根據權利要求2所述的培養基，其特征在于，所述基礎培養基為Advanced DMEM/F12。
4.根據權利要求2所述的培養基，其特征在于，所述血清替代物為N2和B27。
5.根據權利要求2所述的培養基，其特征在于，所述雙抗為青霉素和鏈霉素。
6.根據權利要求2所述的培養基，其特征在于，所述谷氨酸鹽/酯的濃度為2mM。
7.根據權利要求2所述的培養基，其特征在于，所述N-乙酰半胱氨酸的濃度為1mM。
8.根據權利要求2所述的培養基，其特征在于，所述blebbistatin的濃度為10μM。
9.CHIR-99021以及LDN-193189在制備培養基中的用途，所述培養基用于下列的至少之一：
培養腸隱窩，
培養腸干細胞，
促進小腸隱窩細胞增殖和/或分化，
其中，所述CHIR-99021的濃度為7～15μM，所述LDN-193189的濃度為100～200nM，
且所述培養基中不含有EGF。
10.根據權利要求9所述的用途，其特征在于，所述腸隱窩為小腸隱窩或結腸隱窩。
11.根據權利要求9所述的用途，其特征在于，所述腸隱窩為小鼠腸隱窩或人腸隱窩
12.根據權利要求9所述的用途，其特征在于，所述腸干細胞為小腸上皮干細胞或結腸干細胞。
13.一種培養腸隱窩的方法，其特征在于，包括：將包裹在基質膠中的腸隱窩在權利要求1～8任一項所述的培養基中進行培養。
14.根據權利要求13所述的方法，其特征在于，所述腸隱窩為小腸隱窩或結腸隱窩。
15.根據權利要求13所述的方法，其特征在于，所述培養是在無菌、5％CO2和37℃的條件下進行1周～2個月。
16.一種獲得腸干細胞的方法，其特征在于，將腸干細胞的單細胞在權利要求1～8任一項所述的培養基中進行培養或從腸隱窩中分離獲得，所述腸隱窩是通過權利要求13～15任一項所述的方法獲得的。
17.根據權利要求16所述的方法，其特征在于，所述腸干細胞為小腸上皮干細胞或結腸干細胞。
18.根據權利要求16所述的方法，其特征在于，所述培養是在無菌、5％CO2和37℃的條件下進行1周。
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