[發明專利]一種念珠菌屬真菌生物被膜胞外基質的提取方法在審
| 申請號： | 201810083189.3 | 申請日： | 2018-01-29 |
| 公開（公告）號： | CN108373979A | 公開（公告）日： | 2018-08-07 |
| 發明（設計）人： | 邵菁;汪天明;施高翔;段強軍;吳大強;笪文悅;汪長中;顏貴明 | 申請（專利權）人： | 安徽中醫藥大學 |
| 主分類號： | C12N1/16 | 分類號： | C12N1/16;C12N1/00;C12N13/00;C12R1/72 |
| 代理公司： | 蘇州翔遠專利代理事務所(普通合伙) 32251 | 代理人： | 王華 |
| 地址： | 230000 *** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 生物被膜 離子交換樹脂 念珠菌屬真菌 胞外基質 洗脫液 懸浮液 成膜 導管 磷酸二氫鈉緩沖液 微孔濾膜過濾 磷酸氫二鈉 超聲處理 輔助提取 念珠菌屬 提取效率 搖床孵育 緩沖液 上清液 提取液 渦旋 洗脫 搖床 震蕩 應用 | ||
1.一種念珠菌屬真菌生物被膜胞外基質的提取方法，其特征在于：包括下列步驟：
第一步：首先用乙醇浸泡導管片使其無菌，然后將所述導管片取出后浸泡于無菌水中，接著將念珠菌屬的菌種活化，調整菌液濃度為1×106CFU/mL；
第二步：將所述導管片置于所述菌液中，然后進行搖床孵育，使菌種粘附于所述導管片上，接著取出所述導管片置于一容納有1640培養基的離心管中，于37℃恒溫靜置孵育20~28h，以形成生物被膜；
第三步：取出第二步得到的導管片，然后放于磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液或Tris-HCl緩沖液中，接著先進行渦旋震蕩，再進行超聲處理，得到懸浮液；接下來將所述懸浮液與離子交換樹脂置于一容器內進行搖床孵育；
第四步：用500mM的NACl溶液洗脫第三步得到的離子交換樹脂得到洗脫液，然后對所述洗脫液進行搖床作用1.5~2.5小時，洗脫液經0.22μm的微孔濾膜過濾，離心后得到的上清液即為念珠菌屬真菌生物被膜胞外基質提取液。
2.根據權利要求 1所述的念珠菌屬真菌生物被膜胞外基質的提取方法，其特征在于：所述離子交換樹脂為強酸性陽離子交換樹脂。
3.根據權利要求 1所述的念珠菌屬真菌生物被膜胞外基質的提取方法，其特征在于：所述磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液的pH值為5.8~7.8；所述Tris-HCl緩沖液的pH值為7.6~8.1。
4.根據權利要求 1所述的念珠菌屬真菌生物被膜胞外基質的提取方法，其特征在于：所述導管片為凹槽型醫用級聚氯乙烯導管片。
5.根據權利要求 1所述的念珠菌屬真菌生物被膜胞外基質的提取方法，其特征在于：在第二步中，搖床孵育的條件為：37℃、220rpm/min；搖床孵育的時間為4小時。
6.根據權利要求 1所述的念珠菌屬真菌生物被膜胞外基質的提取方法，其特征在于：在第三步中，搖床孵育的條件為：400rpm/min；搖床孵育的時間為3小時。
7.根據權利要求 1所述的念珠菌屬真菌生物被膜胞外基質的提取方法，其特征在于：超聲的條件為：溫度為37℃，超聲功率為50W。
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