[發明專利]一種利用獼猴桃葉片進行組織培養的方法

在審

• 申請號: 201810083010.4
• 申請日: 2018-01-29
• 公開（公告）號: CN107996410A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 蔡小軍;蔡軍利
• 申請（專利權）人: 寶雞松良農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340
• 代理人: 陳永寧

本發明涉及一種利用獼猴桃葉片外植體誘導愈傷組織法，本發明采用無性繁殖方式，使母本的優良性狀完整保留，并通過莖尖脫毒技術使繼代比母本更加優良。并突破了木本組培苗生根質量差的難題，組培苗根系發達，完整，成活率高，無須煉苗，能縮短生產周期60天左右。

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，特別涉及一種利用獼猴桃葉片進行組織培養的方法。

背景技術

獼猴桃(學名：Actinidia chinensis Planch)，是多年生木質藤本植物，獼猴桃的質地柔軟，口感酸甜。味道被描述為草莓、香蕉、菠蘿三者的混合。獼猴桃除含有獼猴桃堿、蛋白水解酶、單寧果膠和糖類等有機物，以及鈣、鉀、硒、鋅、鍺等微量元素和人體所需17種氨基酸外，還含有豐富的維生素C、葡萄酸、果糖、檸檬酸、蘋果酸、脂肪。

傳統獼猴桃的繁殖方法有播種、扦插、壓條和嫁接等。這些方法相對效率較低，目前，已經有很多使用組織培養的方法進行獼猴桃繁育，例如：專利CN102177847A公開了一種軟棗獼猴桃的工廠化育苗方法，包括培養基的配制、外植體的選取與消毒、接種、繼代培養、沙床移栽五個步驟。但這種方法需要配置成分復雜且培養基配置過程要求嚴格的基本培養基、誘導培養基和繼代培養基，操作過程繁瑣，需要投入較多的人力和設備成本，不具有廣泛的適用性。但是現有的組織培養的方法中。存在很多缺點，特別是在生根階段都是需要含糖培養基，但是糖是污染源，容易增大生根階段的污染率，而且，傳統方法生根時只能獲得3-5個主根，而且沒根毛，如圖2所示，需后期煉苗培養。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種利用獼猴桃葉片進行組織培養的方法。

為了解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案予以實現：

葉片外植體誘導愈傷組織法

1.選取健壯植株上翠綠、厚實，離莖尖比較近的葉片做外植體材料，清水洗干凈；

用0.1％氯化汞溶液滅菌10min，再用75％的酒精滅菌5min，無菌水清洗3—5遍；

把處理后的葉片剪成邊長1.5cm大小的方塊，放入誘導培養基上，光照800LX，每天10h，溫度25±2℃，濕度70％，培養50天左右形成獼猴桃愈傷組織。

誘導培養基為：MS培養基+蔗糖20g/L+瓊脂6g/L+6-BA0.8mg/L+NAA(萘乙酸)0.2mg/L+2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)0.5mg/L的培養基；

2.誘導叢生芽

把愈傷組織分割成直徑1cm左右的小塊，清除掉已經死亡的葉片組織，半嵌到MS+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L+6-BA5mg/L+NAA0.5mg/L+IAA0.2mg/L的培養基中，光照2000-2500LX，時間14h，溫度25±2℃，濕度70％，培養50天后愈傷組織表面形成不定芽，獲得初代。

3.繼代培養(增殖培養)把愈傷組織上形成的不定芽插入MS+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L+6-BA1.2mg/L+IAA0.8mg/L的培養基上，光照2000-3000LX，14h，溫度25±2℃，濕度70％，培養25天左右，增值率3-5倍。

4.誘導生根把增殖后達到3cm以上，具有3片以上子葉的植株插入專用生根設備里面的基質上，該基質為MS+蛭石，光照時間16h，溫度25±2℃，濕度80％，二氧化碳濃度900ppm-1000ppm，培養室潔凈度1000級以上。培養20天以后形成根系發達的獼猴桃完整植株。

MS+蛭石為每升MS溶液加800g蛭石。

5.把獼猴桃完整植株移栽到降解袋里面，移植到溫棚，溫度15-30℃，濕度85％，一周后即可移到大田，成活率99％以上。