[發明專利]一種低分子量羊棲菜多糖的制備方法

在審

• 申請號: 201810082292.6
• 申請日: 2018-01-20
• 公開（公告）號: CN108359028A
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 張旭;肖保衡;劉劍;何丹;吳明江;于萍;佟海濱
• 申請（專利權）人: 溫州大學蒼南研究院
• 主分類號: C08B37/04
• 分類號: C08B37/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種低分子量羊棲菜多糖的制備方法，是將羊棲菜洗凈、粉碎、過篩、回流脫脂、冷水浸提、醇沉、冷凍干燥、D101型大孔樹脂脫色，再用三氟乙酸(TFA)水解即可獲得分子量均一，純度較高的低分子量羊棲菜多糖；本發明的反應條件溫和，獲取的低分子量多糖回收率較高；降解試劑容易從反應液中直接清除，產物分離純化方便，并且操作簡單適合工業化生產。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種低分子量羊棲菜多糖的制備方法。

背景技術

羊棲菜多糖(Sargassum fusiforme polysaccharide)是一類含巖藻糖的硫酸多糖，具有抗腫瘤、抗病毒、抗凝血、降血脂、降血糖等生物活性，因此具有很高的藥用價值。然而羊棲菜多糖分子量分布范圍較廣，可從幾千到上百萬道爾頓，由于分子量大、分子體積大、水溶性差、構效關系不明確等缺點，極大地限制了羊棲菜多糖作為藥物的開發。

目前已知的多糖降解方法有化學法、物理法和酶解法等。近年來對于海藻來源的多糖降解已有許多研究，而對于羊棲菜多糖降解方面的研究尚未見有系統的文獻報道。因此，研究羊棲菜多糖的降解方法，以及對多糖降解產物的分子量與生物活性之間關系的探究，為篩選低分子量羊棲菜多糖，開發新產品，發展羊棲菜產業等具有十分重要的意義。同時也可以為羊棲菜多糖的構效關系研究提供借鑒。

發明內容

本發明是針對現有技術的不足，為羊棲菜多糖的降解提供一種操作步驟簡單，耗能耗材少的方法，并獲得糖含量及純度較高、分子量均一的寡糖產品。為低分子量羊棲菜多糖及寡糖的研究和開發提供一條新途徑。

本發明的一種低分子量羊棲菜多糖的制備方法，包括以下步驟：

(1)將洗凈烘干的羊棲菜粉碎，過40目藥篩；

(2)將步驟(1)中得到的羊棲菜藻粉與95％的乙醇充分混合，羊棲菜藻粉∶95％乙醇＝1∶5～15(m∶v)，80℃回流脫脂，時間3h/次，至少重復三次；

(3)將步驟(2)中得到的脫脂后的羊棲菜藻粉按照料液比為1∶20(m∶v)加入蒸餾水浸提，時間8h/次，至少重復三次；

(4)將步驟(3)中得到的浸提液于50℃下減壓濃縮至原體積的2％，加入4mol/L氯化鈣至不再產生沉淀后4500r/min離心10min；

(5)將步驟(4)中得到的上清液于50℃下減壓濃縮至在燒瓶內開始掛壁后緩慢加入95％乙醇至乙醇濃度為80％，醇沉過液，醇沉獲得的沉淀便是羊棲菜多糖；

(6)將步驟(5)醇沉后得到的沉淀，復溶于水，進行減壓冷凍干燥；

(7)脫色處理：利用D101型大孔樹脂作為層析柱(500mL)的填料，將羊棲菜多糖配制成5％的溶液，每次上樣10mL，用0.5～2mol/L的氯化鈉洗脫脫色；

(8)低分子量羊棲菜多糖的制備：以脫色后羊棲菜多糖為原料，將多糖用0.5mol/L三氟乙酸(TFA)溶液配制成5mg/mL的終濃度，65℃水浴反應4～6h，反應結束立刻減壓清除多余的三氟乙酸，并將多糖溶液放入截留量為1k Da透析袋中，流水透析，除去雜質后，便獲得低分子量羊棲菜多糖溶液。

上述方法中，所述的脫色處理是利用D101型號的大孔樹脂作為層析柱(500mL)的填料，將羊棲菜多糖配成5％，每次上樣10mL，收集回收0.5～2mol/L氯化鈉洗脫的組分，并用超濾系統除去收集液里的鹽分及雜質。

上述方法中，所述的羊棲菜多糖溶液降解試劑為三氟乙酸(TFA)，并且是以0.5mol/L三氟乙酸將多糖配制成5mg/mL的最終濃度。

上述方法中，所述水浴密閉條件，是將多糖溶液密封于50mL玻璃管內在65℃水浴反應4～6小時。