[發明專利]一種可視快速檢測食源性致病菌的試劑盒及其方法

在審

• 申請號: 201810081793.2
• 申請日: 2018-01-29
• 公開（公告）號: CN108486258A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 羅潔;孫璇;畢雙同;張鴻
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12Q1/6804;G01N33/543;C12R1/63;C12R1/42;C12R1/01
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 趙艾亮

1.一種可視快速檢測食源性致病菌的試劑盒，其特征在于，采用多重環介導等溫擴增結合膠體金免疫層析法同時檢測食品中副溶血性弧菌、沙門氏菌和單增李斯特菌三種食源性致病菌，其包括引物、LAMP擴增反應體系和膠體金免疫層析三重檢測試紙；

(1)引物：包括含FIP、BIP、F3、B3、LoopF和LoopB，其中BIP引物標記上FITC抗體，LoopB引物標記上熒光探針；

引物序列如下：

tlh-FIP：CTGTCACCGAGTGCAACCACTT-AACCACACGATCTGGAGCA；

tlh-BIP-FITC：GCATCACAATGGCGCTTCCC-ACCGTTGGAGAAAGTGACCTA，5’

端標記熒光素；

tlh-F3：CGCTGACAATCGCTTCTCAT；

tlh-B3：GTTCTTCGCTTTGGCAATGT；

tlh-LF：CTGCATTGCTGCGTCGT；

tlh-LB-Bio：TAACCCGAACAGCTGGTTCT，5’端標記生物素；

invA-FIP：GCATCCGCATCAATAATACCG-CTCTGGATGGTATGCCCGG；

invA-BIP-FITC：GAACGGCGAAGCGTACTGGAA-CATCGCACCGTCAAAGGAA，5’

端標記熒光素；

invA-F3：GTTGTCTTCTCTATTGTCACCGTGGT；

invA-B3：CCGCCAATAAAGTTCACAAAGAT；

invA-LF：TCTGGATGGTATGCCCGGT；

invA-LB-TEX：CATCGCACCGTCAAAGGAA，5’端標記德克薩斯紅；

iap-FIP：AGGTTTTGCTTGAGATTCAGAGAT-TAATCTCCCTTCCACGTACT；

iap-BIP-FITC：TTGACTATGGTAGCGGAATTTCTC-TTAACGCCATTGTCTTGC，5’

端標記熒光素；

iap-F3：CTGGTTACACTAAATATGTATTTGC；

iap-B3：GCCGTGGATGTTATCGTAT；

iap-LF：GTAGTGCTAGCGTATTGTGCG；

iap-LB-DIG：GGTATCTACGTTGGTAATGGTCAA，5’端標記地高辛精；

(2)LAMP擴增反應體系：每25μl反應液含2.5μl 10×的緩沖液，3.5μl dNTP混合液(每一種10mM)，3.9μl引物混合物，其中每組引物各加1.3μl，1μl Bst聚合酶，1μl DNA樣品，無菌去離子補余；

(3)膠體金免疫層析三重檢測試紙：試紙由緩沖液墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊組成。

2.根據權利要求1所述的一種可視快速檢測食源性致病菌的試劑盒，其特征在于，所述試紙的尺寸為5mm×77mm，硝酸纖維素膜的長度為25mm。

3.根據權利要求1所述的一種可視快速檢測食源性致病菌的試劑盒，其特征在于，所述膠體金結合墊上標記鏈霉親和素，硝酸纖維素膜上分別點上鏈霉親和素、小鼠抗DIG單克隆抗體和德克薩斯紅抗體作為檢測線T1、T2和T3，點上羊抗鼠抗體作為質控線C。