[發明專利]促進造血干/祖細胞分化為紅系細胞的誘導培養基及應用

有效

• 申請號: 201810081321.7
• 申請日: 2018-01-29
• 公開（公告）號: CN110093313B
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發明（設計）人: 裴雪濤;李艷華;陳琳;聶紀芹;習佳飛;岳文;姚海雷;張博文
• 申請（專利權）人: 華南生物醫藥研究院;中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

本發明涉及紅系細胞體外誘導分化的方法，具體涉及一種促進造血干/祖細胞分化成紅系細胞的誘導培養基、方法及應用。所述誘導培養基中包括天冬氨酸和/或絲氨酸。所述方法包括將造血干/祖細胞擴增培養；將擴增后的造血干/祖細胞在誘導培養基中培養，所述誘導培養基中包含天冬氨酸和/或絲氨酸。本發明通過研究發現天冬氨酸和絲氨酸對于紅系細胞的誘導分化作用，從而提供了一種可以用來作為誘導分化成紅系細胞的培養基以及用來誘導分化成紅系細胞的方法，該培養基以及該方法可以顯著促進紅系細胞的誘導分化，有利于提高紅系細胞的表達量以及紅系細胞的數量。

技術領域

本發明涉及紅系細胞體外誘導分化的方法，具體涉及一種促進造血干/祖細胞分化成紅?系細胞的培養基、方法及應用。

背景技術

很多因素均能夠影響造血干/祖細胞在體外誘導分化為紅系細胞，包括造血細胞來源、?細胞因子等等。Daud在Metabolic?Profiling?of?hematopoietic?stem?andprogenitor?cells?during?proliferation?and?differentiation?into?red?bloodcells中的研究提示，細胞代謝的變化對造血干/?祖細胞擴增和分化為紅細胞有重要的影響作用。

有關紅系細胞在體外的誘導和成熟有待進一步研究。

發明內容

本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一，從而可以使得造血干/?祖細胞誘導分化為紅系細胞，促進紅系細胞的表達和數量。為此，本發明的一個目的在于?提出一種能夠促進造血干/祖細胞分化成紅系細胞的培養基及其應用、以及提出一種能夠促?進造血干/祖細胞分化成紅系細胞的方法。

本發明基于發明人的如下發現獲得的：

發明人以帶血單個核細胞為種子細胞，經過體外擴增和紅系誘導，檢測誘導過程中氨?基酸水平的變化。然后發現了在體外誘導分化成紅系細胞的過程中，培養基中天冬氨酸?(Asp)和絲氨酸(Ser)的消耗最為明顯。進一步通過實驗發現，單獨或共同補加以上兩種氨基酸能夠提高紅系細胞的細胞數以及紅系細胞的表達量，可以促進紅系細胞的誘導分化。

因此，基于發明人的以上發現，根據本發明的一方面，本發明提供了一種促進造血干/?祖細胞分化為紅系細胞的誘導培養基，所述培養基中包括天冬氨酸和/或絲氨酸。當培養基?中含有天冬氨酸或者絲氨酸或者同時含有天冬氨酸和絲氨酸時，所述培養基可以用來作為?誘導分化成紅系細胞的培養基，從而可以顯著促進紅系細胞的誘導分化，有利于提到紅系?細胞的表達量以及紅系細胞的數量。

根據本發明的一些實施例，所述誘導培養基可以進一步包括如下附加技術特征：

根據本發明的一些實施例，所述誘導培養基中所述天冬氨酸的濃度為50～200nmol/mL；?所述絲氨酸的濃度為200～400nmol/mL。此時可以發揮紅系細胞誘導分化的較佳效果，濃?度過低時，不利于發揮誘導分化的作用；而超過一定的濃度，誘導分化的效果增加不顯著，?因此，當培養基中天冬氨酸的濃度為50～200nmol/mL；所述絲氨酸的濃度為200～400?nmol/mL時，可以發揮較佳的效果。

根據本發明的一些實施例，所述誘導培養基中所述天冬氨酸和所述絲氨酸的摩爾比為：?(50～200)：(200～400)。當在培養基中同時添加天冬氨酸和絲氨酸時，相比較于單一添加?天冬氨酸或者單一添加絲氨酸，紅系細胞誘導分化的效果更為顯著。

根據本發明的一些實施例，所述誘導培養基進一步包括Stemspan基礎培養或者SCGM?基礎培養基。本領域技術人員可知，其他可以用于造血干/祖細胞培養或者增殖或者紅系增?殖誘導的培養基均可以作為所述擴增和誘導培養基的基礎培養基，然后在基礎培養基的基?礎上添加天冬氨酸和/或絲氨酸，可以促進造血干/祖細胞誘導分化為紅系細胞。

根據本發明的一些實施例，所述誘導培養基進一步包括干細胞因子(SCF)，所述干細?胞因子的濃度為30～250ng/mL；