[發(fā)明專利]一種簡(jiǎn)便尋找細(xì)胞特異性抗原的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810081245.X
• 申請(qǐng)日: 2018-01-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108250287A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 裴新輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 裴新輝
• 主分類號(hào): C07K14/47
• 分類號(hào): C07K14/47;C07K16/30
• 代理公司: 北京華仁聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11588
• 代理人: 李冰

本申請(qǐng)公開(kāi)了一種簡(jiǎn)便尋找細(xì)胞特異性抗原的方法。包括以下步驟：A.獲得抗正常細(xì)胞或正常組織的血清；B.用步驟A獲得的抗血清或純化出來(lái)的多克隆抗體處理動(dòng)物；C.用對(duì)應(yīng)的癌細(xì)胞或癌變組織免疫步驟B處理過(guò)的動(dòng)物；D.分離步驟C處理后動(dòng)物的B細(xì)胞；E.分離后的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，獲得單克隆抗體細(xì)胞株；用單克隆抗體細(xì)胞株制備單克隆抗體；F.步驟E獲得的單克隆抗體親和純化癌細(xì)胞的細(xì)胞裂解液，得到與其結(jié)合的抗原蛋白。利用本發(fā)明新方法，不用或者基本不用后續(xù)的負(fù)篩選過(guò)程。這無(wú)疑大大地提高了篩選的效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)抗原抗體篩選技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種簡(jiǎn)便尋找細(xì)胞特異性抗原的方法。

背景技術(shù)

在目前的腫瘤的生物治療方案中，免疫治療是一直是研究和應(yīng)用的熱點(diǎn)。總體上來(lái)說(shuō)，目前主要有兩種主要的方式。一種是基于細(xì)胞免疫的，即讓殺傷性T細(xì)胞識(shí)別并殺傷癌細(xì)胞；另外一種是基于體液免疫的，即獲得腫瘤的特異性抗體，然后通過(guò)抗體激活補(bǔ)體途徑或通過(guò)偶聯(lián)在抗體上的藥物特異性殺傷癌細(xì)胞。但是不管哪種免疫療法，讓免疫系統(tǒng)識(shí)別癌細(xì)胞是最關(guān)鍵的一步。

但是癌細(xì)胞是一種逃逸了機(jī)體免疫監(jiān)視的惡性增生細(xì)胞，它盡可能“偽裝”成正常細(xì)胞，以避免被機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別并清除，因此想要免疫系統(tǒng)識(shí)別癌細(xì)胞變的非常困難。

對(duì)于腫瘤抗體治療來(lái)說(shuō)，最關(guān)鍵的步驟是獲得癌細(xì)胞特異性的單克隆抗體。目前主要有兩種方式獲得腫瘤特異性抗體：

第一種，直接用某種癌細(xì)胞或其提取物免疫小鼠，并獲得抗該癌細(xì)胞的單抗，然通過(guò)用對(duì)照細(xì)胞(如對(duì)應(yīng)的正常細(xì)胞)再對(duì)這些抗體進(jìn)行負(fù)篩選，最終獲得特異性抗體；

第二種，首先通過(guò)分子生物學(xué)手段獲得癌細(xì)胞特異性的蛋白，尤其是膜蛋白，然后用這個(gè)蛋白去免疫并獲得單克隆抗體。

然而這兩種方法都有很多問(wèn)題。如前所述癌細(xì)胞是逃逸了免疫系統(tǒng)監(jiān)控的細(xì)胞，所以雖然從分子尺度上來(lái)看，癌細(xì)胞的確與正常細(xì)胞有很多不同，但是這種不同并不足以激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)。所以，如果用第一種方法獲得抗體，本發(fā)明往往需要從幾千甚至幾萬(wàn)個(gè)克隆中才能夠篩選到一個(gè)癌細(xì)胞特異性的抗體。也因?yàn)檫@種缺陷，這種方法已經(jīng)基本被淘汰。第二種方法也是目前主流的方法，人們已經(jīng)通過(guò)這種方法獲得了一些抗體并獲得應(yīng)用。

但是，本發(fā)明知道，并非一種腫瘤的癌細(xì)胞一定會(huì)表達(dá)這種抗原，即使在一個(gè)腫瘤組織內(nèi)也不是所有的癌細(xì)胞都會(huì)表達(dá)某種特定的抗原。所以，這種抗體僅僅可以識(shí)別并殺傷表達(dá)這種抗原的癌細(xì)胞，而不表達(dá)這種抗原的癌細(xì)胞卻因此被篩選出來(lái)并惡性增生。癌細(xì)胞的這種高變異性也是癌癥難以治療的原因之一。

正因?yàn)榘┘?xì)胞的多變性和多樣性，越來(lái)越多的業(yè)內(nèi)專家認(rèn)為，對(duì)于免疫療法來(lái)說(shuō)，只有幾種或更多的抗體聯(lián)合治療，即“雞尾酒療法”才有可能解決這個(gè)問(wèn)題。但是如前所述，通過(guò)目前主流的這兩種方法想獲得多種特異性的抗體是非常困難的。因此，如何盡可能高效地獲得腫瘤特異性的抗體，已經(jīng)成為腫瘤抗體治療的瓶頸問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于，提供了一種簡(jiǎn)便尋找細(xì)胞特異性抗原的方法。本發(fā)明方法獲得了11種抗HepG2的單克隆抗體。這些單抗對(duì)HepG2有特異性的識(shí)別，而不識(shí)別或基本不識(shí)別HH cell。同時(shí)，與其他組織來(lái)源的癌細(xì)胞相對(duì)比，這些單抗都對(duì)HepG2有特異性的識(shí)別。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種簡(jiǎn)便尋找細(xì)胞特異性抗原的方法，包括以下步驟：

A.獲得抗正常細(xì)胞或正常組織的血清；

B.用步驟A獲得的抗血清或純化出來(lái)的多克隆抗體處理動(dòng)物；

C.用對(duì)應(yīng)的癌細(xì)胞或癌變組織免疫步驟B處理過(guò)的動(dòng)物；

D.分離步驟C處理后動(dòng)物的B細(xì)胞；

E.分離后的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，獲得單克隆抗體細(xì)胞株；用單克隆抗體細(xì)胞株制備單克隆抗體；