[發(fā)明專利]一種簡便尋找細胞特異性抗原的方法

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• 申請日: 2018-01-26
• 公開（公告）號: CN108250287A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發(fā)明（設計）人: 裴新輝
• 申請（專利權）人: 裴新輝
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/30
• 代理公司: 北京華仁聯(lián)合知識產(chǎn)權代理有限公司 11588
• 代理人: 李冰

1.一種簡便尋找細胞特異性抗原的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A.獲得抗正常細胞或正常組織的血清；

B.用步驟A獲得的抗血清或純化出來的多克隆抗體處理動物；

C.用對應的癌細胞或癌變組織免疫步驟B處理過的動物；

D.分離步驟C處理后動物的B細胞；

E.分離后的B細胞與骨髓瘤細胞融合，獲得單克隆抗體細胞株；用單克隆抗體細胞株制備單克隆抗體；

F.步驟E獲得的單克隆抗體親和純化癌細胞的細胞裂解液，得到與其結合的抗原蛋白。

2.根據(jù)權利要求1所述獲得未知特異性抗原癌細胞特異性抗體的方法，其特征在于，所述癌細胞為肝癌細胞。

3.根據(jù)權利要求1所述獲得未知特異性抗原癌細胞特異性抗體的方法，其特征在于，進一步包括：

G.質譜分析步驟F獲得的抗原蛋白。

4.根據(jù)權利要求1所述獲得未知特異性抗原癌細胞特異性抗體的方法，其特征在于，所述步驟A進一步包括：

A1.收集細胞；

A2.重選細胞；

A3.免疫后獲得血清。

5.根據(jù)權利要求4所述獲得未知特異性抗原癌細胞特異性抗體的方法，其特征在于，所述子步驟A1進一步包括：

正常細胞培養(yǎng)擴增至密度達到75～85％時，吸去培養(yǎng)液；先用PBS洗去殘留的培養(yǎng)基，然后再用PBS/8-12mM EDTA處理細胞，使細胞脫落并最終吹打收集細胞。

6.根據(jù)權利要求4所述獲得未知特異性抗原癌細胞特異性抗體的方法，其特征在于，所述子步驟A2進一步包括：

800～1200轉，3-5分鐘離心后，用1％多聚甲醛吹散細胞沉淀，并室溫固定0.3～0.7小時，然后通過離心洗去多聚甲醛，并用PBS重選細胞，細胞計數(shù)后，最終保存于-20℃。

7.根據(jù)權利要求4所述獲得未知特異性抗原癌細胞特異性抗體的方法，其特征在于，所述子步驟A3進一步包括：

取100萬細胞定容于200μl PBS并與200μl完全弗氏佐劑或不完全弗氏佐劑渦旋振蕩混合；免疫5-7周齡小鼠，每只小鼠用100萬細胞免疫，免疫間隔2周，共2-4次；最后一次免疫5-15天后采血收集血清。

8.根據(jù)權利要求1所述獲得未知特異性抗原癌細胞特異性抗體的方法，其特征在于，所述步驟C進一步包括：

C1.收集細胞；

C2.重選細胞；

C3.免疫后獲得B細胞。

9.根據(jù)權利要求8所述獲得未知特異性抗原癌細胞特異性抗體的方法，其特征在于，所述子步驟B1進一步包括：癌細胞培養(yǎng)擴增至密度達到78-82％左右時，吸去培養(yǎng)液；先用PBS洗去殘留的培養(yǎng)基，然后再用PBS/7-13mM EDTA處理細胞，使細胞脫落并最終吹打收集細胞。

10.根據(jù)權利要求8所述獲得未知特異性抗原癌細胞特異性抗體的方法，其特征在于，所述子步驟B2進一步包括：

900～1100轉，3-5分鐘離心后，用0.5-1.5％多聚甲醛吹散細胞沉淀，并室溫固定0.3～0.7小時，然后通過離心洗去多聚甲醛，并用PBS重選細胞，細胞計數(shù)后，最終保存于-20℃。