[發明專利]一種精子體外獲能液、用于體外受精的試劑盒及哺乳動物體外受精方法

在審

• 申請號: 201810081176.2
• 申請日: 2018-01-29
• 公開（公告）號: CN108148800A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 郭紅剛;褚曉峰;李莉;盧領群;杜江濤;石巧娟;戴方偉;應華忠
• 申請（專利權）人: 浙江省醫學科學院;杭州市疾病預防控制中心
• 主分類號: C12N5/076
• 分類號: C12N5/076;C12N5/073
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

本發明公開了一種精子體外獲能液、用于體外受精的試劑盒及哺乳動物體外受精方法。一種精子體外獲能液，包括NaCl 110～140mmol、KCl 2.40～2.95mmol、NaHCO₃ 22.5～27.5mmol、葡萄糖4.8～6.0mmol、丙酮酸鈉0.22～0.30mmol、牛磺酸0.22～0.30mmol、腎上腺素0.04～0.06mmol、BSA 14～16mg/ml、MgCl₂ 0.4～0.6mmol、CaCl₂ 1.6～2.0mmol、DL?乳酸鈉溶液8～12mmol，pH值為7.35±0.10。本發明精子體外獲能液能夠顯著提高長爪沙鼠在體外受精效率，使用本發明方法后長爪沙鼠在體外受精效率大大提高，2細胞發育率達到65％以上，最高可以達到85％，取得了與顯微注射方法相當甚至更高的體外受精率，使用方便，具有很好的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種精子體外獲能液、用于體外受精的試劑盒及 哺乳動物體外受精方法。

背景技術

長爪沙鼠(Mongolian gerbil，Meriones unguiculatus)是研究神經學、寄生蟲學、病毒學、 細菌學、內分泌學、遺傳學、血液學、脂類、糖代謝、腫瘤學、藥理學、放射生物學、生殖 和毒理學的良好模型動物，具有很高的科研價值和應用前景。采用傳統的保種方法，消耗大 量人力物力資源，而且自然災害、意外微生物污染都可能使這些寶貴品系毀于一旦，特殊的 表型在繁育過程中也可能由于遺傳漂變而喪失，因此對其胚胎進行冷凍保存是未來沙鼠資源 保種的主要方式，這就需要有大量的胚胎，體外受精正是獲得大量胚胎的有效途徑。因為長 爪沙鼠精子與胚胎體外培養的特殊性，相關研究一直進展緩慢,迄今為止，仍未找到適合于長 爪沙鼠精子體外獲能、體外受精和胚胎體外發育的培養液。

目前長爪沙鼠胚胎來源主要是超排后體內受精，體外受精技術國內未見報道。Mochida K 等(Mochida K,Matsuda J,Ponce RH,et al.In vitro fertilization andintracytoplasmic sperm injection in the mongolian gerbil(Merionesunguiculatus)[J].BIOCELL,2004,28(2):189.)比較 沙鼠的體外受精和顯微注射的效果，其體外受精率11％，后來選擇顯微注射，提高為63％， 但是顯微注射需要昂貴的儀器。Naoko Kimura等(Kimura N,Sasaki M,Totsukawa K. Development of Mongolian gerbilembryos in chemically defined medium[J].Bull Yamagiwa Univ Agric Sci,2005,14(4):195-200.)沙鼠體外受精率最高為29.8％，

發明內容

本發明針對現有技術中長爪沙鼠體外受精效率低，而顯微注射需要昂貴的儀器的問題， 提供了一種精子體外獲能液、用于體外受精的試劑盒及哺乳動物體外受精方法，提高體外受 精效率。

一種精子體外獲能液，包括NaCl 110～140mmol、KCl 2.40～2.95mmol、NaHCO₃22.5～27.5mmol、葡萄糖4.8～6.0mmol、丙酮酸鈉0.22～0.30mmol、牛磺酸0.22～0.30mmol、腎 上腺素0.04～0.06mmol、BSA 14～16mg/ml、MgCl₂ 0.4～0.6mmol、CaCl₂ 1.6～2.0mmol、DL-乳 酸鈉溶液8～12mmol，pH值為7.35±0.10。