[發明專利]一種精子體外獲能液、用于體外受精的試劑盒及哺乳動物體外受精方法

在審

• 申請號: 201810081176.2
• 申請日: 2018-01-29
• 公開（公告）號: CN108148800A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 郭紅剛;褚曉峰;李莉;盧領群;杜江濤;石巧娟;戴方偉;應華忠
• 申請（專利權）人: 浙江省醫學科學院;杭州市疾病預防控制中心
• 主分類號: C12N5/076
• 分類號: C12N5/076;C12N5/073
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

1.一種精子體外獲能液，其特征在于，包括NaCl 110～140mmol、KCl 2.40～2.95mmol、NaHCO₃ 22.5～27.5mmol、葡萄糖4.8～6.0mmol、丙酮酸鈉0.22～0.30mmol、牛磺酸0.22～0.30mmol、腎上腺素0.04～0.06mmol、BSA 14～16mg/ml、MgCl₂ 0.4～0.6mmol、CaCl₂ 1.6～2.0mmol、DL-乳酸鈉溶液8～12mmol，pH值為7.35±0.10。

2.如權利要求1所述的精子體外獲能液，其特征在于，還包括酚紅及青霉素G、硫酸鏈霉素。

3.一種用于體外受精的試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1或2所述的體外獲能液，還包括體外受精液，所述體外受精液包括：BSA28～32mg/ml，其余組分同體外獲能液。

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，還包括礦物油、孕馬血清促性腺激素和絨毛膜促性腺激素。

5.如權利要求4所述的試劑盒在哺乳動物體外受精中的應用。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述哺乳動物為長爪沙鼠。

7.一種哺乳動物體外受精方法，其特征在于，使用如權利要求3所述試劑盒，包括以下步驟：

(1)取體外獲能液和體外受精液分別做獲能液滴和受精液滴，并分別用礦物油覆蓋液滴，平衡后備用；

(2)取精子放入平衡后的獲能液滴中培養獲能；

(3)取卵子放入平衡后的受精液滴中，然后取步驟(2)獲能后的精子放入受精液滴中，培養受精。

8.如權利要求7所述的哺乳動物體外受精方法，其特征在于，所述獲能液滴為250～350μL/滴，受精液滴為150～250μL/滴，平衡至少30min。

9.如權利要求7所述的哺乳動物體外受精方法，其特征在于，所述哺乳動物為長爪沙鼠，精子獲能時間為4～5h。

10.如權利要求9所述的哺乳動物體外受精方法，其特征在于，取卵子的方法包括以下步驟：

(1)每只長爪沙鼠雌鼠使用40～60IU孕馬血清促性腺激素和40～80IU絨毛膜促性腺激素先后進行超排，兩者間隔96～100h；

(2)絨毛膜促性腺激素注射15～18h后處死雌鼠，取出輸卵管內的卵丘團放入平衡后的受精液滴中。