[發明專利]一種簡單快速的植物基因組DNA的提取方法

在審

• 申請號: 201810079426.9
• 申請日: 2018-01-26
• 公開（公告）號: CN108060161A
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發明（設計）人: 李成偉;于德水;張菊;廖立冰;張怡;徐克東;劉坤;譚光軒;陳璨;付貝貝;謝家星;毛潔
• 申請（專利權）人: 周口師范學院
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 陳勇

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種簡單快速的植物基因組DNA的提取方法。本發明基于CTAB提取法，改進了提取液配方，改變了樣品磨碎方法，優化了操作步驟，可以方便快捷高通量地對植物基因組DNA進行提取，不需要研磨儀等儀器，液氮消耗極少，不需要酚等危險性較高的試劑。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種簡單快速的植物基因組DNA的提取方法。

背景技術

隨著分子生物學研究快速的發展，尤其是近年來植物分子生物學研究的突飛猛進，植物基因組DNA提取作為一項基本的技術在植物分子生物學的研究中使用越來越頻繁。植物突變體的篩選，植物遺傳轉化后轉基因的鑒定，植物基因組編輯的檢測都需要高通量、快速、便捷的植物基因組DNA提取手段。目前高通量植物基因組提取多依賴于特定的儀器或者試劑盒，這些對一些經費不是很充足的實驗室顯然是不可能實現的。傳統的依賴于研缽研磨樣品需要消耗大量的液氮同時需要大量的人力和時間，很難達到高通量快速的效果。由于需要多次樣品的轉移，很容易造成樣品的污染。

發明內容

本發明克服了現有植物基因組DNA提取方法的弊端，基于當前植物基因組DNA提取的需求，提供了一種簡單快速的植物基因組DNA的提取方法。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明提供一種簡單快速的植物基因組DNA的提取方法，包括以下步驟：

步驟1：在2mL EP管中放入一粒5mm鋼珠或兩粒3mm鋼珠；將CTAB溶液放置于65℃烘箱中預熱；

步驟2：將新鮮幼嫩的植物葉片一端放入含有鋼珠的EP管中，扣蓋時利用EP管蓋將管內外的植物組織切斷，完成取樣；

步驟3：接著將EP管放置于EP管板的一端，取另一EP管板夾住EP管，然后將夾有EP管的EP管板在液氮中放置2min后取出；

步驟4：上下劇烈晃動EP管板，直至植物組織破碎；

步驟5：向EP管中加入500～800微升預熱的CTAB溶液，上下輕柔顛倒至均勻，然后放置于65℃烘箱中20～60min，期間每隔10min取出EP管上下輕柔顛倒混勻；

步驟6：然后在通風櫥中向EP管中加入與步驟5中CTAB溶液等體積的抽提液，上下顛倒混勻，室溫靜置5min至分層；

步驟7：12000rpm離心5min；

步驟8：取上清至一新的1.5mL EP管中，加入等體積的異丙醇，-20℃放置20min；

步驟9：12000rpm離心10～15min；

步驟10：棄上清，用1mL體積分數70%或75%乙醇洗沉淀1～2次，棄上清，離心，用移液器吸去多余液體；

步驟11：在超凈工作臺上打開EP管蓋，吹風5～10min，然后加100微升含有RNaseA的蒸餾水溶解DNA。

進一步地，所述CTAB溶液的配方為：2.6%（m/V）的CTAB，13%（V/V）的pH8.0的1MTris-HCl，5.265%（m/V）的NaCl，2.6%（V/V）的0.5M EDTA，加無菌水配制完成后進行過濾除菌或高溫滅菌，使用前加2%（V/V）的β-巰基乙醇；m表示質量，V表示CTAB溶液體積。

優選地，步驟6中所述抽提液為氯仿或體積比為24:1的氯仿：異戊醇混合液。

優選地，步驟7中所述離心的溫度為4℃或室溫。

優選地，步驟9中所述離心的溫度為4℃或室溫。

本發明中所述EP管為eppendorf離心管。

相比現有技術，本發明的有益效果在于：