[發(fā)明專利]一種簡單快速的植物基因組DNA的提取方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810079426.9
• 申請日: 2018-01-26
• 公開（公告）號: CN108060161A
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李成偉;于德水;張菊;廖立冰;張怡;徐克東;劉坤;譚光軒;陳璨;付貝貝;謝家星;毛潔
• 申請（專利權(quán)）人: 周口師范學(xué)院
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 鄭州大通專利商標(biāo)代理有限公司 41111
• 代理人: 陳勇

1.一種簡單快速的植物基因組DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1：在2mL EP管中放入一粒5mm鋼珠或兩粒3mm鋼珠；將CTAB溶液放置于65℃烘箱中預(yù)熱；

步驟2：將新鮮幼嫩的植物葉片一端放入含有鋼珠的EP管中，扣蓋時(shí)利用EP管蓋將管內(nèi)外的植物組織切斷，完成取樣；

步驟3：接著將EP管放置于EP管板的一端，取另一EP管板夾住EP管，然后將夾有EP管的EP管板在液氮中放置2min后取出；

步驟4：上下劇烈晃動EP管板，直至植物組織破碎；

步驟5：向EP管中加入500～800微升預(yù)熱的CTAB溶液，上下輕柔顛倒至均勻，然后放置于65℃烘箱中20～60min，期間每隔10min取出EP管上下輕柔顛倒混勻；

步驟6：然后在通風(fēng)櫥中向EP管中加入與步驟5中CTAB溶液等體積的抽提液，上下顛倒混勻，室溫靜置5min至分層；

步驟7：12000rpm離心5min；

步驟8：取上清至一新的1.5mL EP管中，加入等體積的異丙醇，-20℃放置20min；

步驟9：12000rpm離心10～15min；

步驟10：棄上清，用1mL體積分?jǐn)?shù)70%或75%乙醇洗沉淀1～2次，棄上清，離心，用移液器吸去多余液體；

步驟11：在超凈工作臺上打開EP管蓋，吹風(fēng)5～10min，然后加100微升含有RNaseA的蒸餾水溶解DNA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種簡單快速的植物基因組DNA的提取方法，其特征在于，所述CTAB溶液的配方為：2.6%（m/V）的CTAB，13%（V/V）的pH8.0的1M Tris-HCl，5.265%（m/V）的NaCl，2.6%（V/V）的0.5M EDTA，加無菌水配制完成后進(jìn)行過濾除菌或高溫滅菌，使用前加2%（V/V）的β-巰基乙醇。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種簡單快速的植物基因組DNA的提取方法，其特征在于，步驟6中所述抽提液為氯仿或體積比為24:1的氯仿：異戊醇混合液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種簡單快速的植物基因組DNA的提取方法，其特征在于，步驟7中所述離心的溫度為4℃或室溫。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種簡單快速的植物基因組DNA的提取方法，其特征在于，步驟9中所述離心的溫度為4℃或室溫。