[發明專利]一種檢測阿米巴的PCR引物及方法有效
| 申請號： | 201810077844.4 | 申請日： | 2018-01-26 |
| 公開（公告）號： | CN108018367B | 公開（公告）日： | 2020-07-17 |
| 發明（設計）人： | 謝永平;李軍;吳翠蘭;潘艷;秦若甫 | 申請（專利權）人： | 廣西壯族自治區獸醫研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6893 | 分類號： | C12Q1/6893;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南寧啟創知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 45122 | 代理人： | 謝美萱 |
| 地址： | 530001 廣西*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 阿米巴 pcr 引物 方法 | ||
1.一種檢測阿米巴的PCR引物，其特征在于，該引物為：
amb-F: CGGACGGCTCATTATAACAGT，
amb-R : TCCCGTTATTTTCTGAATCACC。
2.根據權利要求1所述的檢測阿米巴的PCR引物，其特征在于，所述引物設計基于溶組織內阿米巴序列，其擴增片段為16S rRNA，擴增長度為790 bp。
3.一種檢測阿米巴的非疾病診斷目的的方法，其特征在于，所述方法采用如權利要求1或2所述的PCR引物檢測阿米巴原蟲。
4.根據權利要求3所述的檢測阿米巴的非疾病診斷目的的方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）提取待檢樣品的DNA；
（2）對待檢樣品進行PCR擴增反應；
（3）對PCR擴增產物進行電泳檢測。
5.根據權利要求4所述的檢測阿米巴的非疾病診斷目的的方法，其特征在于，所述步驟（2）中先建立PCR反應體系，以每25μl體積為計：
2 × ES
amb-F 1 μL
amb-R 1 μL
DNA模板 2 μL
RNase-Free water 補足25 μL 。
6.根據權利要求4所述的檢測阿米巴原蟲的非疾病診斷目的的方法，其特征在于，所述PCR擴增反應條件是先95 ℃反應5 min；隨后進行循環95 ℃變性30 s，51~57 ℃退火40 s，72 ℃延伸50 s，如此循環30次；最后72 ℃延伸10 min。
7.根據權利要求4所述的檢測阿米巴原蟲的非疾病診斷目的的方法，其特征在于，所述退火溫度為53~55 ℃。
8.根據權利要求4所述的檢測阿米巴原蟲的非疾病診斷目的的方法，其特征在于，所述步驟（3）中對PCR擴增產物進行電泳檢測是在PCR擴增反應結束之后將PCR擴增產物放置在1.5％的瓊脂糖凝膠上進行電泳檢測。
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