[發明專利]一種遺傳分析儀測試專用等位基因標準對照試劑制備方法

在審

• 申請號: 201810075586.6
• 申請日: 2018-01-26
• 公開（公告）號: CN108085367A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發明（設計）人: 姜伯瑋;榮海博;管樺;張濤;金川
• 申請（專利權）人: 公安部第一研究所;北京中盾安民分析技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6811
• 分類號: C12Q1/6811
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明公開了一種遺傳分析儀測試專用等位基因標準對照試劑制備方法，包括：1)進行特定數量生物樣本的獲取；2)PCR法獲得指定位點的系列等位基因；3)核心序列定點突變；4)獲得指定位點全部基因克隆載體；5)設計并合成熒光引物；6)等位基因克隆載體濃度條件摸索并進行調平測試；6)多模板熒光復合擴增并檢測；7)等位基因標準物擴增制備、純化、保存。本發明采用克隆技術將特定STR位點系的列等位基因克隆進入選定克隆載體，進而通過多模板復合擴增技術對上述載體進行熒光擴增，實現等位基因標準對照試劑的可持續性制備。

技術領域

本發明涉及DNA檢驗技術領域，具體涉及一種遺傳分析儀測試專用等位基因標準對照試劑制備方法。

背景技術

DNA檢驗技術，特別是基于STR-PCR的DNA檢驗技術經過多年的發展，已被廣泛用于個體識別和親緣關系認定。基于DNA檢驗技術特有的技術優勢，其已經成為我國公安機關偵查破案、打擊犯罪的一把利劍，法庭科學領域無可爭議的證據之王。同時也被廣泛應用于民事案件、大型災難性事故及群體性突發事件中的個體識別。

近年來，基于多態性的短串聯重復序列進行不同個體區分及識別已經成為當前法醫DNA檢測及個體識別的主流DNA分型技術。特別是最近發展起來多位點熒光STR復合擴增技術具有高效、快速、靈敏度高等優點，已在個人識別、親權鑒定中發揮了相當重要作用。然而，這項技術的應用必須以相應的檢驗設備平臺和檢驗試劑作為有效支撐。

我國法醫DNA分析技術起步較早，早在1985年國際上首次報道DNA指紋技術應用于法醫鑒定以來，我國法庭科學工作者就一直致力于DNA檢驗技術研究工作，在DNA檢驗試劑、提取方法等方面獲得了重要成果，實現了國產化。然而，在檢驗設備平臺方面一直依賴進口，形成了對國外產品的高度依賴。迫于上述現狀，我國在“十一五”期間啟動了基于激光誘導熒光檢測技術的多通道毛細管遺傳分析儀的研制。在研究期間，攻克多項關鍵技術，最終實現了該儀器平臺的國產化，并迅速推廣應用到多家公安機關DNA實驗室。國產遺傳分析儀的研制成功，是我國法醫DNA檢驗技術領域的一項重大突破和創新，打破國外在這個領域長期技術和市場壟斷，滿足了我國公安機關刑事案件DNA檢驗和數據庫建設等工作的需要，對推動公安科技進步、降低DNA檢驗成本起到非常重大的作用。隨著我國法醫DNA檢驗技術的快速發展，遺傳分析儀國產化進程加快推進，法醫DNA檢驗領域對國產遺傳分析儀需求日益增加，這勢必對國產化DNA檢驗設備量產后的質量控制及新型號設備性能評價能力提出更高要求。

遺傳分析儀測試標準對照試劑通常是由多個不同長度熒光標記DNA混合物組成，是遺傳分析儀驗證、檢測和測試的必備試劑之一。標準試劑對于遺傳分析儀的質量控制和性能測試十分重要，是評價和分析遺傳分析儀分型準確性、重復性、篩分精確度、靈敏度等性能指標的重要介質。通過分析標準品在遺傳分析儀上電泳分離結果，可對設備的DNA篩分能力、檢測靈敏度、信噪比、檢驗重復性(不同組之間和不同孔之間)、熒光檢測性能等多項指標形成系統、客觀的評估結果，從而滿足遺傳分析儀的質量控制、性能測試、新設備研發測試等要求。當前市場上不存在商品化的遺傳分析儀測試標準品，目前，通常用商品化等位基因標準物作為測試標準品使用。市場上有多種商品化等位基因分型標準物可供選擇。然而，主要的分型標準物主要還要依靠外國幾家大公司進口，價格昂貴，試劑消耗量大，無疑大幅增加了儀器生產成本，并且僅提供等位基因分型標準物是針對進口設備進行相關激光激發和信號采集情況進行調配，熒光選擇、標準物濃度等均并不能滿足國產設備平臺測試要求，不利于設備質量控制體系及驗證測試體系的建立。