[發(fā)明專利]一種鮑魚血細(xì)胞處理方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810075334.3
• 申請(qǐng)日: 2018-01-25
• 公開（公告）號(hào): CN108396008B
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李明珠;楊熙蕓;孔瑤瑤;李圣強(qiáng);時(shí)心澤;畢秀娟;潘世杰;姚傳偉;李浩宇;孟曉雪;劉明芳;阮澤立
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 魯東大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/078
• 分類號(hào): C12N5/078
• 代理公司: 北京中濟(jì)緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 楊樂

1.一種鮑魚血細(xì)胞處理方法，其特征在于，所述處理方法包括如下步驟：

（1）首先在 2ml 離心管中加入 1ml 抗凝保護(hù)劑；

（2）然后用解剖刀劃開鮑魚腹足部血竇，將鮑魚傾斜 20-30°放在冰上以便血液更易流出； （3）待血液流出，用無菌注射器抽 1ml 血直接注入到加入抗凝保護(hù)劑后的離心管中；所述抗凝保護(hù)劑由以下成分組成：氯化鈉 2.45~2.55g、EDTA 0.9~1.1g、1，4-哌嗪二乙磺酸0.22~0.24g 和 0.1mM PBS 100ml；

（4）用一種用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)的血液過濾器過濾步驟（3）中液體到新的2ml 離心管中； （5）再經(jīng) 18℃，3000rpm 離心 10min，去掉上清；

（6）最后用 1ml 濾菌海水重新懸浮經(jīng)過步驟（5）處理的血細(xì)胞制成鮑血淋巴懸液。

2.根據(jù)權(quán)利要求 1 所述的鮑魚血細(xì)胞處理方法，其特征在于，所述抗凝保護(hù)劑的制備方法為：

（1）將 0.1mM PBS 緩沖液倒入燒杯中，再向燒杯中加入固體氯化鈉粉末攪拌 3-5 分鐘，直到氯化鈉全部溶解，然后再加入 1，4-哌嗪二乙磺酸粉末充分?jǐn)嚢枞芙獾没旌先芤篈； （2）將混合溶液 A 放入 38-40℃水浴鍋中加熱，再緩慢加入 EDTA，邊加入邊攪拌，直到EDTA 完全溶解得混合溶液 B；

（3）將混合溶液 B 轉(zhuǎn)到室溫狀態(tài)下用磁力攪拌器攪拌 0.5-1h，使各組分充分溶解到PBS 緩沖液中；

（4）超凈工作臺(tái)開啟紫外殺菌功能 30-35min，然后在超凈工作臺(tái)上將混合溶液 B 先用 0.45um 無菌濾器過濾除雜放入滅菌藍(lán)蓋瓶中，再用 0.22um 無菌濾器將藍(lán)蓋瓶中液體過濾除菌，最終得到鮑魚血細(xì)胞抗凝保護(hù)劑。

3.根據(jù)權(quán)利要求 1 所述的鮑魚血細(xì)胞處理方法，其特征在于，所述血液過濾器包括固定臺(tái)（1）、豎桿（2）、過濾裝置（3）和置物裝置（4），所述置物裝置（4）放置于過濾裝置（3）的下方，所述過濾裝置（3）通過壓圈桿（5）安裝在豎桿（2）上，所述壓圈桿（5）通過高度調(diào)節(jié)鈕（14）安裝在豎桿（2）上，所述豎桿（2）安裝在固定臺(tái)（1）上，所述過濾裝置（3）包括上壓圈（6）和下壓圈（7），所述上壓圈（6）和下壓圈（7）均和壓圈桿（5）連接，所述上壓圈（6）與下壓圈（7）之間設(shè)置有篩絹。

4.根據(jù)權(quán)利要求 3 所述的鮑魚血細(xì)胞處理方法，其特征在于，所述上壓圈（6）上設(shè)置有四個(gè)壓扣（8），四個(gè)壓扣均布在所述上壓圈（6）的外圍。

5.根據(jù)權(quán)利要求 4 所述的鮑魚血細(xì)胞處理方法，其特征在于，所述上壓圈（6）上設(shè)置有格口網(wǎng)（13），所述格口網(wǎng)（13）具有四個(gè)方形網(wǎng)格。

6.根據(jù)權(quán)利要求 3 所述的鮑魚血細(xì)胞處理方法，其特征在于，所述置物裝置（4）包括置物盒（9）和離心管（10），所述離心管（10）放置在置物盒（9）中。

7.根據(jù)權(quán)利要求 6 所述的鮑魚血細(xì)胞處理方法，其特征在于，所述置物盒（9）內(nèi)設(shè)置有圓柱狀凹槽（11），所述圓柱狀凹槽（11）中放置有冰塊。

8.根據(jù)權(quán)利要求 7 所述的鮑魚血細(xì)胞處理方法，其特征在于，所述圓柱狀凹槽（11）中設(shè)置有兩個(gè)隔離片（12），兩個(gè)隔離片（12）垂直交叉設(shè)置。

9.根據(jù)權(quán)利要求 4 所述的鮑魚血細(xì)胞處理方法，所述壓扣（8）的材質(zhì)為塑料，所述上壓圈（6）和下壓圈（7）的材質(zhì)均為不銹鋼，所述固定臺(tái)（1）為菱形鐵制固定臺(tái)。