[發明專利]豬口蹄疫病毒O型Fc多肽疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810074696.0
• 申請日: 2018-01-25
• 公開（公告）號: CN108330134B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 邵軍軍;常惠蕓;李楊帆;張永光
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;C12N15/70;A61K39/135;A61K47/68;A61P31/14
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發明公開了一種豬口蹄疫病毒O型Fc多肽疫苗及其制備方法和應用。所述的豬口蹄疫病毒O型Fc多肽疫苗中含有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列經原核表達系統表達得到的可溶性豬口蹄疫病毒O型Fc多肽。本發明通過對已經公開的編碼豬口蹄疫病毒O型廣譜多表位重組抗原的核苷酸序列進行了密碼子優化，然后通過重新構建重組質粒、優化誘導及培養條件，實現了靶標蛋白的可溶性表達及純化。可溶性蛋白最大程度模擬了天然抗原的特性，免疫原性更強，抗體水平更高。此外，本發明制備得到的疫苗成份更為簡單，不含3D蛋白成份，降低了疫苗總蛋白含量，在提高免疫效力的同時降低了疫苗成本。本發明的提出對我國豬O型口蹄疫防控提供了物質儲備和技術支撐，具有重要的意義。

技術領域

本發明涉及一種豬口蹄疫疫苗及其制備方法和應用，特別涉及一種豬口蹄疫病毒O型Fc多肽疫苗及其制備方法和應用，本發明屬于醫藥技術領域。

背景技術

口蹄疫作為重大動物疫病不僅嚴重威脅畜牧業的健康發展，而且涉及動物源性食品安全以及其外貿出口。一旦發生疫情損失慘重，影響惡劣。世界動物衛生組織(OIE)將其列為必須通報的傳染病，我國將其列為一類動物傳染病。為了凈化和消滅口蹄疫，我國制定了《國家中長期動物疫病防治規劃(2012-2020年)》和《國家口蹄疫防控計劃(2016-2020)》，把FMD被列為優先解決的動物疫病之一。要實現此目標，必須要有安全、高效、可鑒別診斷的疫苗，而滅活疫苗始終存在病毒逃逸的生物安全隱患，多次免疫后難以區分免疫動物和感染動物，不利于口蹄疫凈化，也不利于我國活畜及產品出口。因此，采用分子生物學技術研制安全、高效的FMD基因工程新型疫苗是實現國家口蹄疫防治規劃的技術保障和物質基礎，也是提高我國口蹄疫防控能力，保障我國畜牧業健康可持續發展，推動農業產業結構調整，促進農民增收，提高活畜及產品的出口能力，提升我國的政治聲譽等的重要途徑，符合國家興農富國的戰略需求。

利用反向疫苗學技術研制口蹄疫表位疫苗已成為可能，本發明發明人前期已經利用該技術研制出了多種口蹄疫表位疫苗均具有較好的免疫效果，并申請了專利保護。其中，公開號為CN102675471A，發明名稱為“豬口蹄疫病毒O型廣譜多表位重組抗原及其應用”的專利申請中公開了一種豬口蹄疫病毒O型廣譜多表位重組抗原，以及由該抗原制備得到的疫苗。但該申請所公開的豬口蹄疫病毒O型廣譜多表位重組抗原的缺點在于其在大腸桿菌中以包涵體形式表達，后期需要經變性處理，甚至還需要復性處理，工藝復雜，回收率低、損失大，成本較高。為了進一步提升表位疫苗的免疫效果，減小與滅活疫苗的差距，本發明充分利用了宿主動物免疫球蛋白(IgG)Fc能與免疫細胞表面的Fc受體結合或補體受體的細胞結合，激發免疫細胞產生免疫效應的免疫學功能，提升表位疫苗的免疫效果的特點，以豬IgG的Fc功能基因為骨架，結合我國O型口蹄疫流行現狀和防控需求，利用分子生物學、生物信息學、生物化學結合蛋白質工程等多種技術對豬口蹄疫病毒O型廣譜多表位基因進行改造和修飾，然后利用Fc基因展示其抗原表位；同時選擇原核表達系統，優化表達條件，實現了豬口蹄疫病毒O型廣譜多表位基因重組蛋白的高通量可溶性表達，通過親和層析純化技術獲得了高純度的靶標蛋白。

本發明用試制疫苗與CN102675471A專利申請中所公開的豬口蹄疫病毒廣譜多表位疫苗同時免疫豬，通過口蹄疫特異性抗體效價和攻毒保護實驗評價可溶性蛋白疫苗的免疫功效。結果顯示，初免21天后，可溶性蛋白疫苗誘導機體產生的抗體水平明顯高于CN102675471A專利申請中所公開的豬口蹄疫病毒廣譜多表位疫苗，加強免疫后，兩種疫苗的抗體水平均明顯升高，但本發明的Fc多肽疫苗免疫豬的平均抗體水平更高，個體差異小，具有統計學差異；采用國家標準對免疫豬進行攻擊，均5/5保護。這充分說明，與CN102675471A專利申請中所公開的豬口蹄疫病毒廣譜多表位疫苗相比，經過密碼子優化、表達系統篩選、表達條件優化的Fc多肽疫苗最大程度模擬了天然抗原的特性，免疫原性更強，抗體水平更高，具有良好的應用前景。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有的豬口蹄疫病毒O型廣譜多表位疫苗制備工藝復雜，成本較高等問題，提供一種經優化改進后的豬口蹄疫病毒O型Fc多肽疫苗及其制備方法。